CD20 微米磁珠

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产品描述：

产品名称：CD20 微米磁珠

描述: CD20 微米磁珠具有尺寸均一、超顺磁性的特点，磁珠上结合的高特异性单克隆抗体 CD20，能够特异性靶向表达 CD20 的细胞。与磁珠结合的细胞可通过磁分离富集纯化，随后通过阳性分选或去除 CD20+细胞即可获得高纯度的目的细胞。

使用方法:

材料准备：
（1）磁力架：用于磁分离；
（2）旋转混匀器：缓慢旋转颠倒混匀，避免与细胞孵育时磁珠沉淀聚集；
（3）分离缓冲液：处理细胞及磁珠与细胞孵育需要的缓冲液，成分是01 M PBS+0.5% BSA+2 mM EDTA，pH=7.4。

注意：BSA 可以用 HSA 或者 FCS 代替；EDTA 可以用柠檬酸钠代替；分离缓冲液体系中避免 Ca²⁺、Mg²⁺。

细胞准备：
（1）当以人外周血全血作为分离样本时，需要密度梯度离心分离出外周血单个核细胞（PBMC），以提高分离效率， 如使用淋巴细胞分离液，具体操作步骤详见淋巴细胞分离液说明书。
（2）当以单个核细胞群作为分离样本时，需用 2 倍（或者更大）体积的分离缓冲液，3000 rpm 离心 20 min，洗涤 一次细胞；
（3）以分离缓冲液重悬细胞至 1×10⁷个/mL，2-8 ℃冷藏备用。

磁珠准备：
（1）取用磁珠前需混匀，可通过涡旋或者振荡、旋转混匀的方式；
（2）根据推荐用量吸取磁珠悬液，使用分离缓冲液洗涤，磁力架磁分离 1 分钟，去掉上清；
（3）撤掉磁力架，使用相同体积的分离缓冲液重悬磁珠备用。

磁性分选 ：

以单次分离 1×10⁷个细胞为例，当分离的总细胞量增加时，按比例增加磁珠用量，单次分离细胞总量不低于 1×10⁷ 个细胞、不高于 1×10⁸ 个细胞。

注意：过高的细胞量易产生非特异性吸附。
（1）吸取 1 mL 含有 1×107 个细胞的悬液，加入 2 mL 的离心管中，加入 20 μL 磁珠悬液，混匀；
（2）2-8℃旋转孵育 20 分钟，避免沉淀聚集；
（3）孵育完成后，将离心管放在磁力架上磁分离 2 分钟，依据需要保存或者丢弃上清；

注意：去除 CD20+细胞：磁分离后吸取上清至新的离心管进行下游应用，不需要进行第 4）步； 阳性分选 CD20+细胞：磁分离后吸取上清并丢弃，进行第 4）步
（4）撤掉磁力架，用 1 mL 分离缓冲液吹打或涡旋重悬，重复第 3）步。 注：为增加分离纯度，建议至少洗涤 2 次。
注意：保持细胞在 2-8 ℃的条件下操作，且分离缓冲液的温度控制在 4℃左右，可有效降低非特异性结合。

推荐用量，以 1×10⁷ 个细胞为例：

分离磁珠与细胞：

若需要分离磁珠和细胞可通过下面两个方式：
（1）带有磁珠的细胞在培育 48 小时后，因细胞周转代谢，带有磁珠的细胞被分离出来。
（2）使用蛋白酶破坏抗原抗体偶联，如木瓜凝乳蛋白酶。 以上两种方案都有局限性，CD20 微米磁珠只有 1-2 μm 大小，可以直接用于流式细胞仪，不需要分离磁珠与细胞。

储存/保存方法: 4℃密封保存，有效期12个月，避免冻存。

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