石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

产品描述：
 

产品介绍：
该产品是专为快速高效的从福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本中提取 RNA 而设计。试剂盒使用我司特别研制的裂解液释放组织中的 RNA，并使用反复优化的消化液去除 RNA 交联和已经降解的小片段 RNA。它采用进口离子膜吸附RNA，而大多数蛋白质、多糖和脂类物资则被去除。与其它品牌的同类产品相比，使用该款试剂盒提取得到的 RNA 纯度更高，可以直接应用于各种 PCR、Southern Blotting 和限制性酶切实验等。

产品特点：
1.裂解液、消化液经专门优化，无需过夜温育即可从福尔马林固定的、石蜡包埋组织中高效纯化基因组RNA；
2.提取的RNA纯度高，A260/A280为1.8-2.0；
3.产率高，同样的样本量提取的RNA更多。

试剂盒组成：

操作步骤：

1. 请自行准备：无水乙醇、异丙醇、灭菌双蒸水、二甲苯及 1.5 mL 离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液 A：按终浓度 30%的比例加入无水乙醇，如 7 mL 加入 3 mL 无水乙醇，14 mL 加入 6 mL 无水乙醇，充分混匀。
b) 洗涤液 B：按终浓度 70%的比例加入无水乙醇，如 3 mL 加入 7 mL 无水乙醇；6 mL 加入 14 mL 无水乙醇，充分混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。
3. 样本处理：
a) 取 5-8 μm 厚石蜡切片 5-10 张（含载玻片），65℃放置 10 分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡 10 分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入 1.5 mL 离心管。
b) 将 5-10 张石蜡切片（不含载玻片）直接放入装有 1.2 mL 二甲苯的 1.5 mL 离心管中，盖紧管盖，60℃金属浴 10 分钟，取出后震荡 10 秒，12,000 rpm 室温离心 2 分钟，彻底弃上清。
c）石蜡块：手术刀刮取 20-30 mg 石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入装有 1.2 mL 二甲苯的 1.5 mL 离心管中，盖紧管盖，60℃金属浴 15 分钟，取出后震荡 10 秒，12,000 rpm 室温离心 2 min，彻底弃上清。
d）福尔马林固定、未包蜡样本：取 30 mg 样本，用手术刀尽量切碎，置于 1.5 mL 离心管中，加入 500 μL 灭菌双蒸水，涡旋振荡 20 秒， 12,000 rpm 离心 2 分钟，弃上清。重复 1 次，转步骤 6 处理。
4. 在上述处理过的脱蜡样本管中加入 1.2 mL 无水乙醇，旋涡震荡 30 秒，12,000 g 离心 2 分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。
5. 开盖，室温放置 5 分钟，去除残留无水乙醇。
6. 加入 200 μL 裂解液 I，30 μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴至组织完全消化裂解。（一般为 30-60 分钟，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间，最好消化至溶液中无可见的组织碎片。）
7. 加入 230 μL 裂解液 II，振荡混匀，56℃水浴 5 分钟。
8. 加入 180 μL 异丙醇，充分振荡混匀。将吸附柱放入收集管内，将混合物用移液器吸入吸附柱内，12,000 rpm 离心 2 分钟，弃收集管内废液。
9. (可选步骤，去除 DNA) 取 RNase-free 离心管 1 只，每份需去除 DNA 的提取样本分别加入 10x DNase I Buffer 6 μL、RNase-free ddH₂O 52 μL 、RNase-free DNase 12 μL，轻轻手振混匀，勿剧烈震荡。用移液器在每份提取样本的吸附膜中央加入 60 μL 上述配制好的 DNase I反应液，室温放置 15 分钟，参见 RNase-free DNase I 试剂盒。
10. 将吸附柱放回收集管内，加 500 μL 洗涤液 A 至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。
11. 将吸附柱放回收集管内，加 500 μL 洗涤液 B 至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。
12. 将吸附柱放回收集管内，加 500 μL 洗涤液 B 至吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。
13. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。同时，按每份样本 30-50 μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取300-500 μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5 mL 离心管，65℃预热。
14. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL RNase-free 离心管内，加入 30-50 μL 预热的洗脱液，静置 3 分钟，12,000 rpm 离心 2 分钟，收集 RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70°C保存。

注意事项：
1、洗涤液在使用前应加入乙醇后充分混匀，最好现用现配，每次根据所需提取的样本量计算后适量配制。
2、本试剂盒提取 RNA 品质有赖于样本本身的质量，组织是否及时固定、固定时间、固定剂种类等均影响 RNA 的完整性。组织放置时间过长未及时固定、固定时间过长超过 24 小时、组织脱蜡不彻底、消化不完全等，都会影响 RNA 的得率和质量。
3、石蜡切片厚度不宜超过 8 μm，组织块应尽可能切碎或用液氮研磨，以便消化完全。
4、样本种类不同、提取样本量多寡都会影响 DNA 残留，如需除去 DNA，使用者可根据需要在在首次实验时，对 DNase I 的使用量进行优化。
5、裂解液、消化液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。
6、由于 RNA 容易降解，提取实验所用器具应除去 RNA 酶，实验过程中最好戴一次性洁净手套、口罩，提取的 RNA 溶液可适当加入RNA 保护因子（货号：abs60330，一般 50 μLRNA 溶液加入 2 μL。）本产品经严格的质量检验证明，无生物污染