去基因组与逆转录一管化三代预混液价格_品牌:爱必信(absin)-丁香通官网

保存条件：-20 ℃保存，有效期24个月。

保质期：24个月

英文名：All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)

库存：99

供应商：爱必信(上海)生物科技有限公司

CAS号：-

规格：100rxns

公告提醒：爱必信所有产品和服务仅用于科学研究，不用于临床应用及其他用途提供产品和服务（也不为任何个人提供产品和服务）!

产品描述：

产品名称：去基因组与逆转录一管化三代预混液

描述: All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链 cDNA 合成试剂盒，包含 M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的 cDNA，下游可用于 qPCR、普通 PCR 等实验。
RNA 中存在基因组 DNA 污染，如果反转录前不做去除处理，下游进行 qPCR 反应时基因组 DNA 与 cDNA 会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用 dsDNase 高效去除基因组 DNA 污染，区别于常规的 DNase I，dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA（dsDNA 以及 DNA 与 RNA 的杂合链），并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染的方法相比，dsDNase 无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase) 作为升级后的一链 cDNA 合成试剂盒，15 分钟内最长可获得 12 kb cDNA。
可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组 DNA 污染与反转录分开进行的操作方法，或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。
产品组成：

组分	规格
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix	400 µl
dsDNase	2×50 µl
10× dsDNase Buffer	200 µl
Nuclease-Free Water	2×1 ml

浓度: 5 ×

使用方法: 针对基因组含量高 RNA 样品
1、基因组 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量
模板 RNA ^a	50 ng~1 μg
dsDNase	1 μl
10× dsDNase Buffer	1 μl
Nuclease-Free Water	To 10 μl

a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃温育时间至 5 min。
④ 65℃温育 2 min，使 dsDNase 失活，冰上放置。

2、第一链 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量（实验组）
“实验 1”反应产物	10 μl
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix	4 μl
Nuclease-Free Water	To 20 μl

② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 50℃温育 15 min；
注：若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构，可预先 25℃温育 10 min。
④ 反应结束后，85℃温育 5 min，以终止反应；
⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于 -20℃储存，建议不超过 1 周；置于 -80℃可长期储存。

针对基因组含量低 RNA 样品
① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量
模板 RNA a	50 ng~1 μg
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix	4 μl
dsDNase	1 μl
Nuclease-Free Water	To 20 μl

a. 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
④ 55℃温育 15 min；
⑤ 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
⑥ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于 -20℃。

注意事项: 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，也适用于不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。

储存/保存方法: -20 ℃保存，有效期24个月。

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