文献支持超纯小RNA快速提取试剂盒

公告提醒：爱必信所有产品和服务仅用于科学研究，不用于临床应用及其他用途提供产品和服务（也不为任何个人提供产品和服务）!

产品描述：

产品名称：超纯小RNA快速提取试剂盒

描述: 本产品为small RNA提取而开发的新一代产品，可用于各种样本（细胞、动物组织、植物组织等）中small RNA的提取，也可用于total RNA的提取。该试剂盒中的裂解液针对small RNA提取进行了优化，具有较强的裂解能力和灵敏度。专门研制的吸附柱采用玻璃纤维素膜，大大增强了small RNA（<200 nt）结合效率。每个吸附柱每次可处理30-50 mg动物组织、100 mg植物组织或1×10⁷细胞。得到的small RNA纯度更好，质量更高，1 h内即可完成所有操作。提取的RNA没有DNA和蛋白污染，可用于Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
产品信息：

使用方法: 实验准备：1、需自备的材料：氯仿。2、第一次使用前请按瓶标在漂洗液 1（WB1）和漂洗液 2（WB2）中加入无水乙醇，并做好标记。操作步骤：对 small RNA 的纯度要求较高时，比如在研究 miRNA 芯片、miRNA 克隆时建议采用此方法。1、柱平衡步骤：向吸附柱和small RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中）分别加入500 μl柱平衡液，12,000 rpm离心2 min， 弃除收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）2、样品处理： （1）动植物组织：将组织在液氮中磨碎，每30-50 mg动物组织或者100 mg植物组织加1 ml裂解液，用匀浆仪进行匀浆 处理。样品体积不应超过裂解液体积的1/10。（2）单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每10 cm2面积加1 ml裂解液，用取样器吹打几次。注：裂解液的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。（3）细胞悬液：400×g离心5 min收取细胞，弃上清。加入1 ml裂解液，振荡器振荡或移液器吸打数次混匀。加裂解液前 不要洗涤细胞，以免降解RNA。3、将匀浆样品在室温放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。4、4℃ 12,000 rpm离心5 min，取上清转入一个新的RNase-free离心管中（可选）。 注：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量 DNA，RNA存在于上清溶液中。5、加入200 μl氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 s，室温放置5 min 。6、4℃ 12,000 rpm离心15 min，样品会分成三层：粉色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体 积约为所用裂解液的50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。7、量取转移液的体积，缓慢加入转移液体积0.43倍的无水乙醇（如500 μl的转移液加215 μl无水乙醇），混匀（此时可能 会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中，室温 12,000 rpm离心30 s，若一次不能将全部溶液和混合物 加入向吸附柱中，请分两次转入，离心后弃掉吸附柱，保留流出液。8、量取流出液的体积，缓慢加入流出液体积0.75倍的无水乙醇（如700 μl的流出液加525 μl无水乙醇），混匀（此时可能 会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入small RNA吸附柱中，室温12,000 rpm离心30 s，若一次不能将全部溶液 和混合物加入吸附柱中，请分两次转入，离心后弃掉流出液，保留吸附柱。9、向吸附柱中加入500 μl漂洗液1（WB1）（请先检查是否已加入乙醇），室温12,000 rpm离心 30 s，弃废液。10、向吸附柱中加入500 μl漂洗液2（WB2）（请先检查是否已加入乙醇），室温12,000 rpm 离心 30 s，弃废液。11、重复操作步骤10一次。 12、将吸附柱放入2 ml收集管中，室温12,000 rpm离心3 min，去除残余液体。 13、将吸附柱转入一个新的 1.5 ml RNase-free离心管中，加30 μl RNase-free ddH2O，室温放置1 min，12,000 rpm 离心1 min。所得的small RNA溶液请立即使用或适量分装后放置在-80℃保存。注：RNase-free ddH2O体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次。补充说明：本试剂盒也可用于 total RNA 的提取，提取的 total RNA 中含有各种 small RNA。对 small RNA 的纯度要求不高时，比如 用于 RT-PCR、Northern blot 时也可以采用此方法。1、按操作步骤1-6进行操作。2、量取转移液的体积，缓慢加入转移液体积1.5倍的无水乙醇（如500 μl的转移液加入750 μl无水乙醇），混匀（此时可能 会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中，室温12,000 rpm离心 30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加 入吸附柱，请分两次转入，离心后弃掉流出液，保留吸附柱。3、向吸附柱中加入500 μl漂洗液1（WB1）（请先检查是否已加入乙醇），室温12,000 rpm离心30 s，弃废液。4、向吸附柱中加入500 μl漂洗液2（WB2）（请先检查是否已加入乙醇），室温12,000 rpm 离心30 s，弃废液。5、重复补充说明4一次。6、将吸附柱放入2 ml收集管中，室温12,000 rpm离心3 min，去除残余液体。 7、将吸附柱转入一个新的1.5 ml RNase-free离心管中，加30-100 μl RNase-free ddH2O，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min得到RNA溶液。所得的RNA溶液应立即使用或适量分装后放置在-80℃保存。注：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次。

储存/保存方法: 常温保存，其中裂解液4℃保存，保质期12个月。

产品信息订购：

产品更多信息请进入爱必信(absin)商城查看》》》

absin，您身边的科研百宝箱
专业提供试剂、耗材、仪器，在线订购，7*24h全国发货，方便快捷！