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保存条件 :参考试剂盒,有效期12个月。
保质期 :12个月
英文名 :-
库存 :现货
供应商 :爱必信(上海)生物科技有限公司
CAS号 :-
规格 :50T
公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述: 产品名称:全血RNA快速提取试剂盒(Dnase I) 描述: 红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free H20将RNA从硅基质膜上洗脱。
使用方法: 提示:1、使用前将 10×RLB(RNase-free)用 DEPC 处理水稀释到 1×。2、操作前在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%,如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。操作:1、在适合大小的RNase free离心管中加入1体积(<1.5 ml)加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠 倒混匀后)和 3 体积的 1×RLB(RNase free),颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀。2、室温放置 10 min(期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞)。 如果 RNA 降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。3、12,000 rpm 离心 20 sec,倒弃红色上清,并小心的尽可能多的吸弃上清(注意不要吸到管底的细胞团),留下完整的管底白细胞团。如发现红细胞大量残留可重复 2,3 步骤。4、涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀完全松散重悬,加 350 μl(<2×10 6白 细胞)或者 600 μl(0.5-1.5 ml 全血或 2×10 6-1×10 7 白细胞)裂解液 RLT,吹打混匀 后用手剧烈振荡 20 sec,充分裂解。5、用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9 mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满 意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高产量。6、较精确估计裂解物体积,加入等体积的 70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!), 此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。 7、将混合物(每次小于 700 μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中(吸附柱放入 收集管中),12,000 rpm 离心 30-60 sec,弃掉废液。8、加 350 μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec,12,000 rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将吸 附柱 RA 放回收集管中。9、.DNase I 工作液的配制:取 10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中,加入 70 μl RDD 溶液,轻柔混匀。10、向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液,室温放置 15 min(一般情况下室温放 置可得到较好的消化效果,如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min)。11、加 350 μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec,12,000 rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将 吸附柱 RA 放回收集管中。12、加入 500 μl 漂洗液 RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心 30 sec, 弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 RW,重复一遍。13、将吸附柱 RA 放回空收集管中,12,000 rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。14、取出吸附柱 RA,放入一个 RNase free 离心管中,根据预期 RNA 产量在吸附膜的中 间部位加 30-50 μl RNase free H2O(事先可在 65℃水浴中加热效果更好),室温放置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min。15、如果提取全血>0.5 ml 或者>2x10 6白细胞,加 30-50 μl RNase free H2O 重复步骤 14, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍。 储存/保存方法: 参考试剂盒,有效期12个月。 注意事项: 1、第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! absin,您身边的科研百宝箱 |
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