植物RNA快速提取试剂盒（DNase Ⅰ)

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产品描述：

产品名称：植物RNA快速提取试剂盒（DNase Ⅰ)

描述: 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。每次可处理50～100mg植物组织，可用于RT-PCR、Northern blot等实验。是本公司超越了Qiagen 、Promega等公司同类产品质量的代表产品。
产品特点：
1、重复性好，离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。
2、操作安全，不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3、简便快捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4、PLANTaid的加入有助于多糖多酚含量高的植物RNA提取。
自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇 （Dnase I）
产品信息：

使用方法: 提示：1、第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇! 2、操作前在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。 操作：1、直接研磨法（推荐）: （1）新鲜植物组织称重后取 100 mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样 品可直接称重后取 100 mg 放入研钵），加入 10 体积（1 ml）RLT(请确定已加入β- 巯基乙醇)和 1 体积（100 μl）PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速 研磨让组织和裂解液 RLT 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。 （2）将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡 15 sec，12,000 rpm 离心 5-10 min，沉淀为不 能裂解的碎片和结合有多糖多酚的 PLANTaid，取 450 μl 裂解物上清转到一个新离 心管。（3）加入上清体积一半的无水乙醇（0.5 体积），此时可能出现沉淀，但是不影响提取 过程，立即吹打混匀，不要离心。（4）立刻接操作步骤项下 3。2、液氮研磨法: （1）取 500 μl 裂解液 RLT(已经加入β-巯基乙醇)，转入 1.5 ml 离心管中，加入 50 μl PLANTaid 混匀备用。（2）液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取 50mg 细粉转入上述装有 RLT 和 PLANTaid 的离心管，立即用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。 在 56℃温育 1-3 min 有助于裂解植物,但是淀粉含量高的植物不能温育，因为提 高的温度可能导致淀粉膨胀。（3）用带钝针头的一次性 1 ml（配 0.9 mm 针头）注射器抽打裂解物 10 次或直到得到 满意匀浆结果（或者电动匀浆 30 sec），可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。（4）将裂解物 13,000 rpm 离心 5-10 min，沉淀为不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid，将所有裂解物上清转到一个新离心管。（5）较精确估计裂解物（上清）体积，加入 0.5 体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀， 但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。（6）立刻接操作步骤项下 3。3、将混合物（每次小于 700 μl，多可以分两次加入）加入一个吸附柱 RA 中（吸附柱放 入收集管中），12,000 rpm 离心 60 sec，弃掉废液。4、加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将 吸附柱 RA 放回收集管中。5、DNase I 工作液的配制：取 10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中，加入 70 μl RDD 溶液，轻柔混匀。6、向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液，室温放置 15 min（一般情况下室温放 置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min）。7、加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将吸 附柱 RA 放回收集管中。8、加入 500 μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 sec， 弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 RW，重复一遍。9、将吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分 钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10、取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中 间部位加 30-50 μl RNase free water（事先在 70-80℃水浴中加热效果更好），室温放 置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min。11、如果预期 RNA 产量>30 μg，加 30-50 μl RNase free H2O 重复步骤 10，合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍（如果需要 RNA 浓度高）。 洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高 15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

储存/保存方法: 参考试剂盒说明书，有效期12个月。

注意事项: 1、需要自备一次性注射器（可选），研钵。
2、裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3、关于DNA的微量残留: 由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其微量的 DNA 残留（一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见） 影响不是很大，如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
（1）选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 （2）选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

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