Western Blot（免疫印迹）

提供商 ：佰欧晶医学

服务名称 ：Western Blot（免疫印迹）

规格 ：每张膜（整张）

Western Blot蛋白免疫印迹是对目的蛋白进行检测、分析以及定量的一种技术。蛋白质样品经SDS-PAGE 分离后从凝胶转移到固相支持物（如PVDF膜）上，后用特异性抗体对某一特定的抗原进行着色，分析着色的位置或深度获得该蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况。

蛋白质免疫印迹的检测方法主要有直接检测和间接检测两种。间接检测是加入未标记的第一抗体与抗原结合后，用酶/荧光团标记的二抗来检测一抗，染色显影后对目的蛋白进行分析;而直接检测是用酶/荧光团缀合的一抗检测印迹上的目的抗原，直接检测在实验操作中应用很少。

Western Blot实验操作

常规试剂及材料

1. PBST 、PBS 、Tween-20
2. SDS-PAGE电泳液缓冲液
3. Western blot转膜缓冲液
4. 10xTBS缓冲液
5. 1xTBST缓冲液
6. 封闭缓冲液：5%的脱脂奶粉溶液
7. 一抗/二抗稀释缓冲液
8. 转膜用的夹子，两块海绵垫，一支滴管，滤纸，一张PVDF膜，转膜槽，转移电泳仪，摇床，计时器，磁力搅拌器，转子，Western blot盒，SDS-PAGE胶，脱脂奶粉

   A：电泳分离蛋白质，由裂解细胞或组织制备目的蛋白质样品，经SDS-PAGE电泳处理后，不同分子质量大小的蛋白质得到分离。

   B：转膜，将电泳分离的条带从凝胶转移至NC/PVDF膜上。常用的方法是电洗脱或电泳转移，形成“负极-海绵-三层滤纸-胶-膜-三层滤纸-海绵-正极”转膜结构，在施加电场后蛋白质从凝胶中移出并吸附在膜表面。

   C：抗体孵育，用目标蛋白的抗体（一抗）处理膜，漂洗除去未结合的抗体，膜上仅含有目标蛋白结合的一抗。再用标记的二抗进行酶免疫定位。

   D：显影分析，用x-ray底片曝光，根据信号的强弱调整曝光时间或不同时间多次压片以达到最佳效果。曝光完成后取出x-光片迅速浸入显影液中显影，待条带明显后停止显影，分析结果。