间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒

品系 ：详见说明书

ATCC Number ：-

细胞类型 ：详见说明书

肿瘤类型 ：-

CAS号 ：-

供应商 ：武汉赛奥斯生物

库存 ：99

注册证号 ：-

英文名 ：-

生长状态 ：详见说明书

年限 ：-

运输方式 ：常温/干冰

器官来源 ：详见说明书

是否是肿瘤细胞 ：-

细胞形态 ：详见说明书

免疫类型 ：详见说明书

物种来源 ：详见说明书

相关疾病 ：-

组织来源 ：详见说明书

规格 ：盒

产品描述

本产品为赛奥斯团队精心优化的间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成脂细胞分化的能力。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

产品组成成分及保存

试剂名称	体积	保存条件	有效期
地塞米松	200μL	-20℃	1 Year
IBMX	200μL	-20℃	1 Year
罗格列酮	200μL	-20℃	1 Year
胰岛素	400μL	-20℃	1 Year
谷氨酰胺	2mL	-20℃	1 Year
双抗	2mL	-20℃	1 Year
胎牛血清	20mL	-20℃	1 Year
基础培养基	200mL	2-8℃	1 Year
油红O贮存液	5mL	2-8℃（避光）	1 Year

Ø 注意：

1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。

2.配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。

产品使用说明

1. 成脂诱导分化完全培养基的配制

①室温条件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬时离心，使溶液集中于离心管底部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）

②根据实验用量，于无菌操作台中配制诱导分化完全培养基，建议每次配制50mL，配制比例见下表：

试剂成分	配制比例	50mL配制体系
地塞米松	0.1%	50μL
IBMX	0.1%	50μL
罗格列酮	0.1%	50μL
胰岛素	0.2%	100μL
谷氨酰胺	1%	500μL
双抗	1%	500μL
胎牛血清	10%	5mL
基础培养基	补充至所需体积	补充至总体积为50mL

2. 成脂诱导分化实验步骤

①建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化下来，离心收集，使用间充质干细胞完全培养基调整细胞密度为1~5×105个cell/mL，均匀铺于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。

（注意：此处细胞密度及培养液体积以6孔板为例，若为其它培养器皿，请根据实际情况调整细胞密度及培养液体积。）

②待细胞汇合度达80%~100%时，即可进行诱导分化。

③小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，每孔2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。

（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）

③每2day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，培养基消耗较快导致的，请及时调整为每日换液。

（注意：完全培养基加入前需提前置于37℃预热。）

④细胞诱导3周后，即可进行油红O染色鉴定。

3. 油红染色分析

①细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次。每孔加入1mL细胞固定液（4%中性甲*醛溶液等），室温固定30 min。

②配制油红O工作液：油红O贮存液与蒸馏水按照3：2配制，（例：油红O贮存液3mL，蒸馏水2mL），混匀。使用滤纸过滤，收集滤液，即为油红O工作液。

（注意：成脂细胞内的油滴极易脱落，操作时须谨慎。）

③细胞固定完成后，吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入油红O染色液，每孔1mL，室温染色30min。

（注意：油红O工作液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）

④吸出染色液，PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果。细胞内油滴着色，呈红色。

（注意：油红O工作液不可重复使用，不建议回收。）

质量控制

· 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）

· pH测试

· 渗透压检测

· 内毒素

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       网址：www.51cells.cn

  

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