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供应商 :北京云肽生物科技有限公司
Qiagen微量样本全基因组扩增试剂盒150025
Qiagen微量样本全基因组扩增试剂盒150025产品简介:产品品牌:QIAGEN
产品名称:凝胶回收试剂盒
产品货号: 150025
产品规格:250T/盒
Qiagen微量样本全基因组扩增试剂盒150025产品说明:
对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增
- 扩增获得10 µg DNA,产量稳定
- 同时扩增多个基因组位点
- 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
- 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
- 长期储存不会导致DNA降解
Performance
从多种样本中得到高产量DNA,可用于多种应用
REPLI-g Mini Kit可用于多种样本,包括基因组DNA、新鲜或干血、新鲜或冰冻组织、细胞。50 μl反应体系的常规DNA产量可以达10 μg(参见"Consistent DNA yields using any sample type")。不同的模板质量均可扩增得到同样的DNA产量(参见"Uniform DNA yield from various amounts of template")。从不同的模板浓度获得一致的DNA产量十分要,对于高通量应用而言尤其如此,在下游的基因分析中不需要纯化或定量。
产物平均长度大于10 kb,在2 kb到100 kb之间,因此能够用于复杂的限制性酶切和长片段PCR等下游应用。REPLI-g扩增的DNA十分适用于基因分型,如使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型(参见"Reliable SNP genotyping "),测序和STR/微卫星分析(参见"Accurate genotyping")。
成功应用于二代测序
许多文献已展示了REPLI-g技术扩增的DNA在二代测序中的成功应用,包括肿瘤细胞的外显子组测序、全基因组测序、宏基因组学的研究、以及单细胞分析。对于将全基因组扩增DNA用于二代测序一直有一些争论,因此我们检测了可能影响全基因组扩增DNA在下游应用中表现的影响因素。我们发现:起始材料的质量对二代测序实验有很大影响。如果使用的是低质量DNA(如降解的DNA),或长时间保存的组织材料,用扩增获得的DNA进行二代测序则无法获得可靠结果。但是,对完整细胞或未降解的纯化后DNA使用REPLI-g技术进行全基因组扩增,然后用于二代测序,结果可与纯化的基因组DNA的测序结果相媲美。分析测序结果的各基因组位点和错配率得出结论,全基因组扩增后垃圾DNA水平低,扩增获得的DNA和纯化获得的DNA的错配率基本相同(参见"Comparable NGS (next-generation sequencing) results obtained using purified gDNA or REPLI-g amplified DNA")。
可靠的全基因组扩增
REPLI-g技术提供高度均一的全基因组扩增。Phi29聚合酶可复制长达70 kb的DNA,而不会从DNA模板上脱离(参见"Schematic representation of REPLI-g amplification")。与基于PCR的全基因组扩增技术不同,Phi29聚合酶具有3'→5'外切酶校对活性,在复制过程中的高保真性是Taq DNA聚合酶的1000倍。试剂盒中提供的抗外切酶的引物可确保DNA的高产量,优化的全基因组扩增缓冲液体系适用于长片段DNA,对各位点进行均一的扩增。
REPLI-g技术的性能优于基于PCR的全基因组扩增技术
传统方法扩增基因组DNA需要进行耗时的EBV转化细胞系步骤,并用随机或变性的寡聚核苷酸引物进行全基因组扩增。基于PCR的方法(如:DOP-PCR和PEP)会产生非特异性的扩增产物,不能完全覆盖所有位点。有时,产生小于1 kb的DNA,在许多下游应用中都无法使用。由于使用低保真酶Taq DNA聚合酶,产物DNA突变率较高,扩增易出错,会导致碱基对突变。REPLI-g技术没有这些缺陷,并能够高度均一的扩增全基因组,位点偏差小、错配率小(参见"Highly representative amplification using REPLI-g technology" and "Consistent and accurate whole genome amplification")。
Principle
独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶,利用多重置换扩增(MDA)技术扩增复杂的基因组DNA,并结合温和的碱变性,均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg,如需更多产量,可使用REPLI-g Midi Kit;因为这两个试剂盒的实验方案相同,反应体积也相同。反应体系构建十分简便,仅需约15分钟的手动操作时间,因此REPLI-g技术使用简便、可靠,适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。
扩增原理
REPLI-g利用等温基因组扩增,即多重置换扩增(MDA)技术:随机引物与变性DNA结合,在等温环境中,在Phi29聚合酶的作用下,进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板,与引物结合,扩增生成高产量的DNA(参见"Schematic representation of REPLI-g amplification")。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3'→5'外切酶活性,准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合,能够轻松的打开DNA的二级结构,如发卡结构,所以可确保在扩增过程中,聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb,没有序列偏差(参见"Unbiased amplification with Phi29 polymerase")。
DNA的碱变性
在酶扩增前,必须使基因组DNA变性,这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Mini Kit采用温和的碱性环境孵育,使DNA变性,而片段化程度低,突变少。由此扩增获得的DNA十分完整,扩增的片段长,覆盖所有基因组位点和序列。使用REPLI-g Mini Kit能够获得可靠的结果,确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA,导致扩增结果不准确(参见"Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation")。
Procedure
便利的单管操作
REPLI-g Mini Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增(参见"REPLI-g Mini and Midi procedure")。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性,之后进行短暂孵育(参见"REPLI-g Mini and Midi procedure")。中和后加入预混液(包括REPLI-g Mini DNA Polymerase),在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存(参见"Consistent long-term stability")。
温馨提示:不可用于临床治疗。
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Qiagen | 离心柱 | 79654 | * |
Qiagen | 核苷酸去除试剂盒 | 28304 | 50T |
Qiagen | 石蜡包埋组织miRNA和总RNA纯化试剂盒 | 217504 | 50T |
Qiagen | DNA Maker | 929559 | 50ul |
Qiagen | 逆转录试剂盒 | 205313 | 200T |
Qiagen | 退火缓冲液 | 979009 | 250ml |
Qiagen | 转染级质粒纯化试剂盒 | 10023 | 25T |
Qiagen | 微量样本miRNA和总RNA提取试剂盒 | 217084 | 50T |
Qiagen | 转染级质粒或柯斯质粒DNA提取试剂盒 | 10091 | 5T |
Qiagen | 质粒中提试剂盒 | 12943 | 25T |
Qiagen | 质粒中提试剂盒 | 12945 | 100T |
Qiagen | 血液和培养细胞中高分子量DNA小提试剂盒 | 13323 | 25T |
Qiagen | P1缓冲液 | 19051 | 500ml |
Qiagen | P2缓冲液 | 19052 | 500ml |
Qiagen | P3缓冲液 | 19053 | 500ml |
Qiagen | 基因组DNA提取缓冲液套装 | 19060 | Genomic tip |
Qiagen | 溶解和结合缓冲液Buffer QG | 19063 | 250ml |
Qiagen | Buffer AW1 | 19081 | 242ML |
Qiagen | 脱蜡溶液 | 19093 | 16ml |
Qiagen | 蛋白酶K | 19131 | 2ml |
Qiagen | 收集管 | 19560 | 10x96 |
Qiagen | 收集管盖 | 19566 | 120x8 |
Qiagen | 噬菌体DNA纯化试剂盒 | 27704 | 50T |
Qiagen | 重力流纯化柱 | 30622 | 12x1.5ml |
Qiagen | 谷胱甘肽基质 | 30971 | 5x1ml |
Qiagen | 高纯度线粒体提取试剂盒 | 37612 | 12T |
Qiagen | 哺乳动物细胞总蛋白提取试剂盒 | 37901 | 100T |
Qiagen | 微生物DNA纯化试剂盒 | 50214 | 50T |
Qiagen | 病毒RNA/DNA自动高通量提取试剂盒 | 54161 | 5T |
Qiagen | 甲基化分析实验对照 | 59655 | 100T |
Qiagen | 植物/真菌总DNA试剂盒 | 68163 | 24T |
Qiagen | 甲基化分析标准对照DNA液 | 70042 | 1000T |
Qiagen | RNA提取试剂盒 | 74204 | 50T |
Qiagen | 石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒 | 74404 | 50T |
Qiagen | 脂肪组织总RNA小提试剂盒 | 74804 | 50T |
Qiagen | 细胞RNA稳定试剂 | 76526 | 250ml |
Qiagen | 脂肪和标准组织样本裂解试剂 | 79306 | 200ml |
Qiagen | DNA/RNA和蛋白质共纯化试剂盒 | 80004 | 50T |
Qiagen | 细胞总RNA提取试剂盒 | 80224 | 50T |
Qiagen | 组织切片基因组DNA和总RNA纯化试剂盒 | 80234 | 50T |
Qiagen | DNA/RNA共纯化试剂盒 | 80284 | 50T |
Qiagen | 洗涤液 | 979008 | 200ml |
Qiagen | 难裂解组织DNA/RNA/miRNA提取试剂盒 | 129056 | 200x2ml |
Qiagen | RNA酶抑制剂 | 129916 | 500reactions |
Qiagen | 微量样本全基因组扩增试剂盒 | 150025 | 100T |
Qiagen | 单细胞全基因组扩增试剂盒 | 150343 | 24T |
Qiagen | 单细胞全基因组扩增试剂盒 | 150345 | 96T |
Qiagen | 酵母和细菌高品质DNA纯化试剂盒 | 158567 | 200ml |
Qiagen | 蛋白沉淀液 | 158912 | 350ml |
Qiagen | taqDNA聚合酶预混液试剂盒 | 203443 | 250U |
Qiagen | 微卫星位点多重PCR分析试剂盒 | 206241 | 70T |
Qiagen | 一步法RT-PCR试剂盒 | 210210 | 25T |
Qiagen | 血清/血浆无细胞总RNA提出试剂盒 | 219610 | 0 |
Qiagen | Carrier RNA | 1017647 | 0 |
Qiagen | DNA高分辨率分析试剂盒 | 929002 | 1200T |
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