文献支持CCK8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂)CCK-8

库存 ：现货

英文名 ：CCK8

CAS号 ：暂无

保质期 ：有效期12个月

供应商 ：无锡菩禾生物医药技术有限公司

保存条件 ：-4°

规格 ：1ml

• 本产品仅限于科学研究使用。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
• 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔(具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔)的本底吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
• 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。
• 使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。
• 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
• 加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。
• 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
• 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸光度即可。

1. 在 96 孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)，通常细胞增殖实验每孔约 2000 个细胞，细胞毒性实验每孔约 5000 个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
2. 按照实验需要，进行培养并给予 0-10μL 特定的药物刺激，并孵育一段时间(例如:6、12、24 或 48 小时)。
3. 向每孔加入 10μL CCK-8 溶液。如果起始的培养体积为 200μL，则需加入 20μL CCK-8 溶液，以此类推。
4. 在细胞培养箱内继续孵育 1-4 小时，具体时间可以通过预实验确定。
5. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光值，若无 450nm 滤光片，可以使用 420-480nm 的滤光片，但是 450nm 检测灵敏度最高。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于 600nm 的波长，例如 650nm，作为参考波长进行双波长测定。
6. 如果需要暂时不测定 O.D 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1M HCl 溶液或者 1% w/v 的SDS 溶液，避光保存在室温，24 小时内吸光度不会发生变化。

1. CCK-8检测后，细胞是否可用于其他实验？

1. 吸光度值太低

1. 适当增加细胞数量；
2. 延长加入CCK-8溶液后的孵育时间。

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