血浆外泌体提取试剂盒

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英文名 ：Exosome Isolation Kit (from plasma)

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供应商 ：北京百奥创新科技有限公司

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规格 ：具体价格请联系我们

产品介绍
EZBioscience® Exosome Isolation Kit（来自血浆）提供了一种简单、可靠、快速的方法，可从人和动物血浆中分离出高质量的总外泌体，无需超速离心。分离的外泌体主要用于核酸检测。 外泌体是含有 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），由培养中的各种细胞分泌，在血液、唾液、尿液和母乳等体液中大量存在。据报道，外泌体作为细胞间信使发挥作用，在特定细胞之间传递效应物或信号大分子；然而，它们的形成、货物的组成以及它们所涉及的生物途径仍不清楚。 外泌体功能和运输的生物学和医学研究需要分离完整的外泌体，但目前使用的方法繁琐且困难。 EZBioscience 外泌体分离试剂盒（来自血浆）提供了一种简单且 从人和动物血浆样本中浓缩完整外泌体的可靠方法。 通过水分子，外泌体分离试剂将溶解性较差的成分（即外泌体）从溶液中挤出，从而可以通过短暂且相对低速的离心来收集它们。 使用该试剂盒可在 4 小时内从血浆中分离出外泌体。 分离出的外泌体可用于RNA的纯化和检测，如RNA测序、RT-qPCR等。
产品组分

Component	EZB-exo1
Exosome Precipitation Reagent (EPR)	20 ml

外泌体沉淀试剂含有足够的试剂来处理多达 60 ml 的血浆。
保存条件
将外泌体沉淀试剂储存在 2°C 至 8°C。

准则
a) 不建议使用外泌体沉淀试剂 (EPR) 从任何其他体液或细胞培养基中分离外泌体。专门的外泌体分离试剂可用于血清、尿液、细胞培养基和其他体液，每种试剂都针对其特定类型的生物样品进行了优化。
b) 对于血液样本，如果计划进行下游 RNA 表达谱分析，请勿使用溶血样本。即使是血清或血浆中的微量红细胞也会影响 RNA 谱。相反，我们建议使用血清或柠檬酸盐/EDTA 血浆，不鼓励使用肝素血浆（从肝素血浆中分离的 RNA 会降低 PCR 性能）。
准备样品
1. 从储存中取出血浆样品并置于冰上。如果样品被冷冻，则将样品置于 25°C 至 37°C 的水浴中直至完全解冻，然后置于冰上直至需要。
2. 将血浆样品在 20°C 下以 3000 × g 离心 10 分钟以去除细胞和碎片。
3. 转移 将含有部分澄清血浆的上清液转移到新试管中，而不会干扰沉淀。
4. 将新管在 20°C 下以 10000 × g 离心 20 分钟以去除碎屑。
5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新试管中，不要干扰沉淀，将其置于冰上直至准备好进行分离。
分离外泌体
注意：如果您的兴趣与外泌体中的蛋白质有关，建议使用蛋白酶 K 处理以去除血浆中的大部分蛋白质，但这可能会导致暴露在外泌体表面的蛋白质部分降解。 如果您只对外泌体中的 RNA 感兴趣，则不需要蛋白酶 K 处理。
1. 将所需体积的澄清血浆转移到新试管中，加入 0.5 体积的 1× PBS。 通过涡旋彻底混合样品。
2. 向样品中加入 20% 总体积（即总体积 = 血浆 + PBS）外泌体沉淀试剂（来自血浆）。

Plasma + PBS	Reagent
200 µl + 100 µl	60 µl
1 ml + 0.5 ml	300 µl

3. 通过涡旋或倒置充分混合血浆/试剂混合物，直至溶液均匀。将样品在 2 ~ 8°C 下孵育 2 小时。
注意：如果需要，此沉淀步骤可以延长至过夜。
4. 孵育后，将样品在 20°C 下以 10000 × g 离心 30 分钟。
注意：对于小鼠血浆，在 4 °C 下离心 30 分钟。
5. 通过移液器小心吸出上清液并丢弃。
注意：外泌体包含在试管底部的颗粒中。
6. （可选）以 10000 × g 离心管 30 秒以收集任何残留试剂。用吸管小心吸出任何残留的上清液。
重悬外泌体
1. 向沉淀中加入 1× PBS 或类似缓冲液，上下涡旋或移液器重悬外泌体。

Starting Plasma Volume	Resuspension Volume
200 µl	20 µl
1 ml	100 µl

2. 一旦沉淀重悬，外泌体就可以进行下游分析或通过亲和方法进一步纯化。
注意：纯化后的外泌体样本可在 2 ~ 8°C 下保存长达 2 天，也可在 -20°C 以下长期保存。为了最大限度地降低 RNase 污染的风险，我们建议直接进行进一步的下游样品处理。