顺乌头酸酶(ACO)测试盒_分光光度法(稳定高效灵敏)

保存条件 ：低温保存

保质期 ：6个月

英文名 ：ACO测试盒

库存 ：597

供应商 ：江西江蓝纯生物有限公司

规格 ：50管/48样

中文名称：顺乌头酸酶(ACO)测试盒
测定方法：分光光度法
测定规格：50管/48样
保存条件：低温避光保存

测定意义：
顺乌头酸酶（aconitase），三羧酸循环中的酶，催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化，在顺乌头酸酶作用下，通过脱水与加水反应，使羟基由β碳原子转移到α碳原子上，生成易于脱氢氧化的异柠檬酸，为进一步的氧化脱羧反应作准备。



测定原理：
ACO 催化柠檬酸转化成异柠檬酸，异柠檬酸氧化脱羧将 NAD+ 还原生成 NADH，导致 340nm 处光吸收上升。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆转入离心管内 600g，4℃离心 5min。
3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、上清液即胞浆提取物，可用于测定胞质顺乌头酸酶活性。
5、在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体顺乌头酸酶活性测定。

注　意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定