线粒体呼吸链复合体Ⅴ_ATP合酶_三磷酸腺苷合酶检测试剂盒_江蓝纯生物供应(微量法)

保存条件 ：低温保存

保质期 ：6个月

英文名 ：ATP合酶活性三磷酸腺苷合酶活性含量测试盒

库存 ：227

供应商 ：江西江蓝纯生物有限公司

规格 ：100管/48样

中文名称：线粒体呼吸链复合体Ⅴ_ATP合酶_三磷酸腺苷合酶检测试剂盒
测定方法：微量法
测定规格：100管/48样
保存条件：低温避光保存

测定意义：
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。



测定原理：
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入800uL试剂二和8uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅴ酶活性测定。

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定