辅酶ⅡNADP(H)科研专用测试盒/可见分光光度法

保存条件 ：低温保存

保质期 ：6个月

英文名 ：H测试盒

库存 ：476

供应商 ：上海机纯实业有限公司

规格 ：50管/24样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
酸性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
碱性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体15 mL×1瓶，4℃保存； 
试剂二：粉剂×1支，-20 ℃保存，用时加入4mL蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂三：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入4mL蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1支，4 ℃保存，用时加入4mL蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂五：液体1.8mL×1支，4 ℃保存；
试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。

NADP+和NADPH的提取：
1 血清（浆）中NADP+和NADPH的提取
NADP+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

NADP+和NADPH的提取：
NADP+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3 细胞或细菌中NADP+和NADPH的提取：
NADP+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。