纤维素酶检测试剂盒(DNS比色法)

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英文名 ：纤维素酶检测试剂盒

保质期 ：6个月

供应商 ：上海晶抗生物工程有限公司

保存条件 ：避光低温保存

规格 ：100T

纤维素酶检测试剂盒(DNS比色法)
产品简介：
纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，Cellulase简称CES)是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。在分解纤维素时起生物催化作用，是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。

纤维素酶Cellulase广泛存在于自然界生物体中。细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌，比较典型的有木霉属(Trichoderma)、曲霉属（Aspergillus）和青霉属(Penicillium）。微生物纤维素酶在转化不溶性纤维素成葡萄糖以及在果蔬汁中破坏细胞壁从而提高果汁得率等方面具有非常重要的意义。纤维素酶在食品行业和环境行业均有广泛应用。在进行酒精发酵时，纤维素酶的添加可以增加原料的利用率，并对酒质有所提升。

纤维素酶检测试剂盒(DNS比色法)检测原理是用羧甲基纤维素钠盐(CMC)作底物，经纤维素酶水解后生成还原糖(葡萄糖)，还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸(DNS)被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈正比，在540nm处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度，即可求得还原糖的含量，进而求得纤维素酶活的大小。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、去离子水或蒸馏水
2、电子天平、振荡器、纱布、离心机、离心管或试管
3、三角瓶、容量瓶、水浴锅、培养箱、分光光度计、比色皿

操作步骤(仅供参考)：
1、标准曲线绘制：取7支试管按下表设置，准确吸取Glu标准(1mg/ml)与CESAssaybuffer
混匀，即得不同浓度的葡萄糖液。

每管中各加0.9mlDNS显色液，摇匀后置于沸水浴中准确加热5min，流水冷却。以”0”号管调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定540nm处各管的吸光度。
2、准备样品：
称取样品10g(或10ml)加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加人一定体积的蒸馏水稀释，静置20min，200r/min振荡30min，然后四层纱布过滤，滤液3000r/min离心10min，上清液加入50ml容量瓶中，补水定容，即为纤维素酶提取液，用于样品CES活力的检测。如样品酶活力较高，应稀释至合适浓度再次检测。
3、加样：提前把CMCSolution在60℃水浴中预热。取3支离心管按下表设置依次加入：
4、测定：以”0”号管调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定540nm处对照管、测定管的吸光度。

计算：
以系列葡萄糖标准(μg/ml)(1~6号)为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，作图得标准曲线，根据标准曲线计算出酶提取液(对照管、测定管)的吸光度相对应的葡萄糖浓度，根据下式再计算纤维素酶活性。

纤维素酶活力单位定义：在60℃条件下，1ml酶提取液，1min催化羧甲基纤维素钠水解产生1μg葡萄糖定义为1个酶活力单位(U)。根据酶活性定义，计算出样品中的纤维素酶活性。

注意事项：
1、Glu标准应避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、待测酶提取液样品如不能及时测定，应置于-20℃保存，3天内稳定。
3、如果样品酶活性过高，应用蒸馏水稀释酶提取液后重测，结果乘以稀释倍数。
4、待测样品中不能含有纤维素酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
5、纤维素酶的适pH一般在4.5~6.5。葡萄糖酸内酯能有效的抑制纤维素酶，重金属离子如铜和汞离子，也能抑制纤维素酶，但是半胱氨酸能消除它们的抑制作用，甚至进一步激活纤维素酶。植物组织中含有天然的纤维素酶抑制剂；它能保护植物免遭霉菌的腐烂作用，这些抑制剂是酚类化合物。如果植物组织中存在着高的氧化酶活力，那么它能将酚类化合物氧化成醌类化合物，后者能抑制纤维素酶。
6、本试剂盒亦适用于其他样品的纤维素酶活性测定，但需有相关资料做为参考依据。
7、CESAssaybuffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

采用酶标仪540nm测定，“0”号管吸光度为0.14左右，呈，100μg/ml以上呈棕红色并逐渐加深。测定结果显示，当葡萄糖浓度大于350μg/ml时，OD值开始偏离，当葡萄糖浓度在100~250μg/ml以内比较合适，因此当测定结果明显偏高应稀释后再测。因测定仪器及操作手法等不同，测定结果可有一定偏差。