乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-L比色法)

库存 ：999

英文名 ：LDH检测试剂盒

保质期 ：6个月

供应商 ：上海晶抗生物工程有限公司

保存条件 ：避光低温保存

规格 ：100T

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-L比色法)品简介：
乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，LDH或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙-酮-酸(P)之间的氧化还原反应。其反应公式：乳酸+NAD+→丙-酮-酸+NADH+H+。其中：L→P为正向反应；P→L为逆向反应。

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-L比色法)是利用乳酸脱氢酶催化上述正反应，即L-乳酸+NAD+→丙-酮-酸+NADH+H+，在上述反应过程中乳酸氧化成丙-酮-酸，同时NAD+氧化成NADH，引起340nm处吸光度的升高，其升高速率与样品中LDH活性呈正比关系，通过分光光度计或自动分析仪检测340nm处吸光度升高速率，通过计算获得乳酸脱氢酶的活性。该LD-L法的优点是：1、乳酸盐和NAD+底物溶液的稳定性比LD-P法中的丙-酮-酸和NADH底物溶液；2、线性速率反应时间范围较宽；3、重复性比LD-P法和二硝-基苯-肼法；4、准确性比二硝-基苯-肼法；5、适用于自动分析仪。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。


自备材料：
1、离心管或小试管
2、水浴锅
3、比色杯
4、分光光度计或自动分析仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，室温保存3天，用于LDH的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存3天，用于LDH的检测。
③长期保存样品：如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法操作：
取LDH保护剂1支，加入1ml的LDH保护稀释液，配制成LDH保护工作液，-20℃避光保存；按待测样品(如血清)：LDH保护工作液=9:1的比例混合，4℃避光保存。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH含量。
2、配制LDH检测工作液：取1支NAD，按NAD：LD-LAssaybuffer=1支：100ml的比例混合，即为LDH检测工作液，即配即用，不宜久置。
3、分光光度计测定：按照下表设置测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的LDH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置平行管。
比色杯光径1cm，立即以分光光度计340nm处读取各管吸光度，记录为A测定1。3min后立即以分光光度计340nm处读取各管吸光度，记录为A测定2。注意：由于酶促反应时间较短，建议加样时间越短越，其反应基本在1~3min内，其后反应趋于平缓，由于检测仪器、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同，参考值范围会有波动。
4、自动分析仪测定：如果样品中的浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置平行管。根据实验室的自动分析仪性能，设置参数，下列参数仅供参考：
记录待测样品管吸光度的升高速率(ΔA/min)。        

注意：如果待测样品加入LDH保护工作液，其结果应除以0.9。

参考范围：
成年健康人    109～245U/L

注意事项：
1、处理后的样品应及时检测，否则LD4和LD5易失效。
2、血清或肝素抗凝血浆检测效果较，草酸类、EDTA抗凝剂对LDH活性有抑制作用。
3、避免使用溶血样品。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。