Cas13a检测系统用双标记探针（RNA Biotin和FAM双标记）

Cas13a检测系统用RNA Biotin和FAM双标记探针

CRISPR_Cas核酸酶主要包括两类：一类是RNA引导下可以切割RNA链的Cas13a和Cas13b；另一类是RNA引导下可以切割DNA链的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一个共同特点，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，还可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的这种附加切割能力比Cas12a要强。

Cas13a与Cas9最大的区别在于Cas13a结合并切割RNA，而Cas9切割DNA。从结构上来看，Cas13a含有两个HEPN结构域，而Cas9用HNH和RuvC结构域来切割DNA目标。HEPN结构域对Cas13a切割RNA目标是必需的。另外，与Cas9类似，Cas13a分子中关键残基的突变可以形成核酸酶活性缺失的Cas13a（dCas13a），它能够结合RNA目标但无法切割。

Crispr Cas13a核酸酶（又名 C2c2）是依赖于RNA介导的RNA内切核酸酶。在靶标单链 RNA 存在 PFS序 列的情况下，可特异地切割靶标 RNA。此外，Cas13a还具有依赖于靶标单链RNA的反式切割活性 （即，旁路切割活性），可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。例如，MIT 的张锋团队便利用Cas13a 蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统。SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白识别靶标RNA并反式切割 RNA报告探针。

RNA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP6、T7等经体外转录合成标记RNA。FAM是常用的荧光基团，连接在Taqman探针的5’末端。s上海惠诚生物提供Cas13a检测系统用双标记探针（RNA Biotin和FAM双标记）。

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