HC80202-04 Cas12a检测系统用双标记探针（DNA Biotin和FAM双标记）

上海惠诚生物提供Cas12a检测系统用双标记探针（DNA Biotin和FAM双标记）。

CRISPR_Cas核酸酶主要包括两类：一类是RNA引导下可以切割RNA链的Cas13a和Cas13b；另一类是RNA引导下可以切割DNA链的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一个共同特点，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，还可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的这种附加切割能力比Cas12a要强。Cas12a的靶基因是ssDNA和dsDNA，并且Cas12a引导链需要识别PAM序列（Cas12a的PAM序列为TTTV）。

Cas12a 核酸酶（其他名称 Cpf1）是依赖于 RNA 介导的内切核酸酶，在靶标 DNA 存在 PAM 的情况下， 可特异地切割靶标双链 DNA。与 Cas9 不同：（1）Cas12a 只需要单个 crRNA，且体积更小、更易 被递送至细胞中；（2）Cas12a 切割后产生粘性末端，更利于基因组精确编辑；（3）Cas12a 的切 割位点远离其识别位点，为连续多次编辑提供了可能性；（4）Cas12a 识别的 PAM 序列与 Cas9 不 同，因此提供了不同编辑位点的选择；针对不同的 Cas12a 蛋白，其识别靶标所需的 PAM 位点不 同，其中部分 Cas12a 蛋白识别 TTN 位点，部分 Cas12a 蛋白识别 TTTN 位点。

DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。

DNA探针技术又称分子杂交技术，是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等标记的特定DNA片断，该片断可大至寄生虫基因组DNA，小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA（或RNA）按碱基顺序互补结合时，以氢健将2条单链连接而形成标记DNA-DNA（或标记DNA-RNA）的双链杂交分子。将未配对结合的核苷酸溶解后用检测系统（放射自显影或酶检测等）检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性，单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交，由此决定了探针的特异性；用放射性同位素（如32P）或生物素标记探针，使杂交试验同时具有高度的敏感性。

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