Rat(GnRH) ELISA KIT ( 大鼠促性腺激素释放激素 )

Rat(GnRH) ELISA KIT ( 大鼠促性腺激素释放激素 )

价格: ¥1600 - 2200

品牌:NEWLF®

货号:NLR143

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产品详情

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供应商 :武汉纽斯特生物技术有限公司

库存 :1000

样本 :血清 组织,细胞提取液

适应物种 : 大鼠

应用 :双抗夹心

检测方法 :双抗夹心法

检测限 :1 ng/L -48 ng/L

规格 :96T/48T

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)水平。用纯化的大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入促性腺激素释放激素(GnRH),再与 HRP 标记的促性腺激素释放激素(GnRH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促性腺激素释放激素(GnRH)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)浓度。
 

用途:本试剂盒用于体外定量检测大鼠 血清、血浆、或其他生物液中大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)浓度。  


基本性能
 
性能
灵敏度 0.25ng/L
检测范围 1 ng/L -48 ng/L
特异性 可检测样本中的大鼠中大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)浓度。
且与其他类似物无明显交叉反应
重复性 板内,板间变异系数均《10%



试剂盒组成及保存
  
中文名称                规格                             开封后保存条件

ELISA A酶标板
96T:8 孔×12 条
48T:8 孔×6 条
2-8℃ 90天
   
标准品
96T:0.5mlx1 96 ng/L
48T; 0.25mlx1
2-8℃ 90天

HRP标记抗体
96T:6mlx1 
48T:3mlx1
2-8℃ 90天

样品稀释液
96T:6mlx1 
48T:3mlx1
2-8℃ 180天

标准品稀释液
96T:1.5mlx1 
48T:1mlx1
2-8℃ 180天

显色剂A
96T:6mlx1 
48T:3mlx1
2-8℃(避光  180天

显色剂B
96T:6mlx1 
48T:3mlx1
2-8℃(避光  180天

终止液
96T:6mlx1 
48T:3mlx1
2-8℃ 180天   180天

30倍浓缩洗涤液
96T:20mlx1 
48T:10mlx1
2-8℃ 180天   180天

说明书
1份  

封板膜
3张  

密封袋
1个  
 
说明;未拆封的试剂盒可以在2-8℃ 保存六个月

            
试剂盒所需自备物品
 
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱
4. 双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
6. 加样槽


样品收集方法(具体处理方法请咨询)
 
1. 血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右  (2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
 
2.血浆应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成应该再次离
3.尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
4.组织匀浆用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将剪碎的组织与 对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适 当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步 裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10分钟,取 上清检测。

5.细胞提取液贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮 细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。 将提取液于2-8℃,1500×g离心10分钟,取上清检测。

6.细胞培养上清或其他生物体液收集液体后于2-8℃,1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(
n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。

样本收集注意事项

1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本处理方法。


检测前准备工作
 
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温。
2.用双蒸水将30×浓缩洗涤液稀释成1×工作液。未用完的放回4 ℃。
3.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
 
48 ng/L 5号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
 
24 ng/L  4号标准品 150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
 
12 ng/L  3号标准品 150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
 
6 ng/L     2号标准品 150μl 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
 
3 ng/L     1号标准品 150μl 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
 


操作步骤;
 
1.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液.
40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。  
3.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
4.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
5.温育:操作同 2
6 洗涤:操作同 3
7 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
8. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终 止液后 15 分钟以内进行。


结果判断

 
1.每个标准品和标本的OD 值应减去空白孔的OD 值
2.以标准品的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,利用计算机软件采用直线回归的拟合方法创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。
3.若样本的OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数据

由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。详情请看质检报告.

产品详请请登录:http://www.newlif.com.cn/RatEliSA/142

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