HBMEC人脑微血管内皮细胞（暂不提供）

英文名 ：Human Brain Microvessel Endothelial Cells

库存 ：20

物种来源 ：人

器官来源 ：脑

规格 ：T25

细胞介绍血管内皮细胞的损伤是脑血管疾病发生的使动环节，血管内皮细胞通过释放和合成多种血管活性因子，在血管自稳态的过程中发挥重要作用。细胞特性1）来源：人脑部2）形态：贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。细胞用途：仅供科研使用。细胞接收后的处理：1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。4）如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。                       细胞培养操作规程，供参考一．培养基及培养冻存条件准备：1）准备ECM培养基；北美胎牛血清，5%；ECGS，1%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。二．细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中(1:3)或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例:1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。