细胞周期检测

提供商 ：华丘生物

服务名称 ：细胞周期检测

规格 ：样

1. 技术简介

细胞周期（cell cycle)指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束的活动过程，细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数，研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。细胞周期由G0/G1期、S期、G2期和M期组成：

（1）G0 期：细胞停止分裂，进入静止状态，DNA含量为二倍体；

（2）G1期：DNA 合成前期，细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体；

（3）S 期：DNA 合成期 ，DNA含量介于二倍体和四倍体之间；

（4）G2 期：DNA 合成后期，DNA复制成四倍体；

（5）M期：细胞分裂期，DNA含量为四倍体。

 

 

2. 技术原理

PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，结合流式细胞仪，检测细胞内DNA荧光强度变化，得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，判断细胞所处的细胞周期，同时可计算出各个期的百分含量。PI染色后， G0/G1期细胞的荧光强度为2N，那么G2/M期细胞的荧光强度的为4N，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为2N-4N之间。

 

3. 实验方法

（1） 细胞转染后48小时后每样收集1×10⁶细胞

（2） 细胞固定：离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70%乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。

（3） 细胞染色：离心收集细胞，以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化丙锭（PI），100ug/mL RNase A, 0.2% Triton X-100, 4℃避光孵育30分钟。

（4）流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

 

 

4. 结果案例