产品详情
文献和实验
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库存 :100
英文名 :SNP Genotyping kit
CAS号 :无
保质期 :6个月
供应商 :弗元生物
保存条件 :-20
规格 :1000T
MGB荧光探针法SNP分型试剂盒(rs1229984)货号 | 规格 | 目录价 | 活动价 |
FYG-rs1229984-1000T | 10ul×1000次 | 3600 | 3420 |
FYG-rs1229984-2000T | 10ul×2000次 | 6400 | 5760 |
FYG-rs1229984-1000T
FYG-rs1229984-2000T
存储条件:
2-8 ℃ 保存,有效期1周;
-20 ℃保存,有效期6个月;
避免反复冻融。
产品组分:
编号 | 名称 | 500T | 1000T | 2000T |
A | RealFAST ProbePCR mix | 1.3 ml×2 | 1.3 ml×4 | 1.3 ml×8 |
B | Primer & Probepremix | 0.5 ml×1 | 0.5 ml×2 | 0.5 ml×4 |
C | Lo-ROX(50×) | 0.1 ml×1 | 0.2 ml×1 | 0.4 ml×1 |
D | ddH2O | 1 ml×2 | 1 ml×3 | 1 ml×6 |
本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有灵敏度高、区分度高、可重复性高、抗干扰性强等特点。试剂盒包含RealFAST Probe PCR mix 、Lo-ROX、Primer & Probe premix 、ddH2O等SNP分型所需的所有试剂,无需另外准备配套试剂,具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。
自备耗材和设备:
移液器2 μl,10 μl,100 - 200 μl;
冰盒;
荧光定量PCR管;
实时荧光定量PCR仪。
反应设置与操作过程:
1. 探针分型:
FAM标记A型;VIC标记G型。
2. 反应体系:
PCR反应体系(10 μl): | |||||
名称 | 体积(μl) | ||||
RealFAST Probe PCR mix | 5 | ||||
Primer & Probe premix | 1 | ||||
Lo-ROX(50×) | 按机器品牌与型号添加 | ||||
DNA | 1(10 - 40 ng) | ||||
ddH2O | 补足至10 μl | ||||
仪器型号对Lo-ROX添加的要求: | |||||
仪器 | 终浓度 | ||||
ABI PRISM 7000 /7300 /7700 /7900HT /Step One | 5×(即:Lo-ROX 1μl /10μl体系) | ||||
ABI 7500 /7500 Fast; Stratagene Mx3000P /Mx3005P /Mx4000 |
1×(即:Lo-ROX 0.2μl /10μl体系) | ||||
Roche仪器; Bio-Rad仪器; Eppendorf仪器 |
无需添加 | ||||
反应条件: | |||||
项目 | 温度 | 时间 | 循环数 | ||
预变性 | 95 ℃ | 5 min | 1 | ||
变性 | 95 ℃ | 10 sec | 40 | ||
退火/延伸 | 60 ℃ | 30 sec* | |||
3. 操作过程:
3.1 试剂准备:试剂盒从-20℃冰箱取出,室温融化;涡旋仪混匀,瞬时离心待用。
3.2 用量计算:根据需要检测的样本数n,配置n+4个反应体系混合液。即5×(n+1)μl RealFAST Probe PCR mix、(n+1)μl Primer&Probe premix (rs1229984)、0.2×(n+1)μl Lo-ROX(50×)、2.8×(n+1)μl ddH2O。(若反应数较大,可适当多增加几个反应。)
3.3 反应混合液配制:将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中,涡旋仪混匀,瞬时离心。(若反应数较大,可选用较大EP管。请务必旋窝充分混匀!)
3.4 添加反应混合液:按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排(或96孔板)。
3.5 添加模版:将1μl已经定量并稀释至10-40 ng/μl 的DNA模板加入分装的反应体系中。
3.6 添加质控:三种质控质粒中各取1 μl分别加入到反应体系中,构成三个阳性质控(可选);加入1 μl ddH2O与另一反应体系中,构成阴性质控。
3.7 瞬时离心:八联排(或96孔板)盖上管盖(或封膜),瞬时离心,使DNA模板与反应体系混合并处于管底。(请务必进行瞬时离心,否则可能出现无扩增的结果!)
3.8 上机:将八联排(或96孔板)放入ABI7500PCR仪,根据反应条件设置ABI 7500软件,开机运行。(请根据选用的机型进行相关设置。)
3.9 特别说明:配置体系过程中,需要戴一次性乳胶手套(或PE手套);避免接触管盖(或封膜),防止污染,导致荧光信号不准确。阳性质控质粒拷贝数极高,应严格规范操作,防止交叉污染。
注:操作请在冰盒上进行。
常见问题:
1. 存储条件与反复冻融如何选择?
该产品-20 ℃条件下可以存储6个月;2-8 ℃可以存储1周。组分A、B、C均不能反复冻融,融化后不建议再次冻存。
2. 反应体系的确认?
该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系,需自行验证后在进行大量样本的检测。
3. 反应条件是否可以改动?
本试剂盒的反应条件根据多种参数确定,并适用于10 μl反应体系,为确保实验数据的准确性,不建议改动。
4. 机器设备的适用与选择?
该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪,但注意Lo-ROX的添加有所不同,需严格按照试剂盒和机器说明书进行。
5. 出现无扩增?
该实验为精细实验,对操作要求较高。请按照说明书操作,尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率,可选择加倍反应体系,例如使用20 μl体系进行初步学习,实验条件可不变。
6. 如何避免未扩增的样本出现假分型结果?
不同引物的扩增背景荧光强度不同,分析结果需要判断是背景还是扩增产物荧光。因样本质量或加样失败均会导致扩增失败,此时背景荧光容易被误判为扩增信号,导致判读基因型错误。为避免此情况发生,在数据判读前,应先辨别所有样本及阴阳性对照(若有)扩增曲线是否正常;若出现无扩增或扩增曲线异常的样本,应先剔除,然后分析其他样本的基因分型结果,此样本查明情况后重新检测。
7. 扩增曲线荧光信号弱,或扩增曲线呈锯齿状?
此问题可能有多种原因造成,常见原因及解决办法见下表。
原因 | 解决办法 |
检测光谱设定误差 | 不同荧光定量PCR仪的检测光谱范围有差异,根据所用仪器型号设置检测的荧光信号范围。 |
荧光采集时间太短 | 扩增曲线锯齿状较明显时,将延伸时间设定为45 - 60 秒可得到改善。 |
目标DNA的拷贝数过少 | 目标DNA拷贝数只有几倍到几十倍时,容易形成线性混乱,提高样品浓度再进行反应。 |
样本浓度过低或严重降解 | 更换高浓度样本或质量更好样本进行实验。 |
弗元生物是国家高新技术企业、上海市科委认定的科技型企业,致力于打造具有国际影响力的生物医学品牌。公司以干细胞与再生医学研究为核心,业务经营范围辐射生物医学领域的多个相关学科。团队拥有自主研发的核心知识产权,在国际期刊杂志发表论文8篇,中文核心期刊发表论文1篇,申请国家发明专利7项,已获得授权的实用新型专利2项,拥有注册商标9项。
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