文献支持MGB荧光探针法SNP分型试剂盒说明书（rs231775）

库存 ：100

英文名 ：SNP Genotyping kit

CAS号 ：00000

保质期 ：6个月

供应商 ：弗元生物

保存条件 ：-20

规格 ：1000T

MGB荧光探针法SNP分型试剂盒说明书（rs231775）

货号	规格	目录价	活动价
FYG-rs2317715-1000T	10ul×1000次	3600	3420
FYG-rs2317715-2000T	10ul×2000次	6400	5760

 

产品编号：

FYG-rs231775-500T

FYG-rs231775-1000T

FYG-rs231775-2000T

存储条件：

2-8 ℃ 保存，有效期1周；

-20 ℃保存，有效期6个月；

避免反复冻融。

产品组分：

编号	名称	500T	1000T	2000T
A	RealFAST ProbePCR mix	1.3 ml×2	1.3 ml×4	1.3 ml×8
B	Primer & Probepremix	0.5 ml×1	0.5 ml×2	0.5 ml×4
C	Lo-ROX（50×）	0.1 ml×1	0.2 ml×1	0.4 ml×1
D	ddH2O	1 ml×2	1 ml×3	1 ml×6

产品简介：
阿托伐他汀用药相关CYP2D6基因多态性检测试剂盒（rs1065852）
本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有高灵敏度、高区分度、高重复性、抗干扰性强等特征。该试剂盒包含RealFAST-Probe PCR mix 、Lo-ROX、Primer & Probe premix 、ddH₂O等SNP分型所需的所有试剂，具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。
 
自备耗材和设备：
2 μl 移液器，10 μl 移液器，100 - 200 μl 移液器；
冰盒；
荧光定量PCR管；
实时荧光定量PCR仪。
反应设置与操作过程：
1. 探针分型：
FAM标记A型；VIC标记G型。
 
2. 反应体系：
 

PCR反应体系（10 μl）：
名称	体积（μl）
RealFAST-Probe PCR mix	5
Primer & Probe premix	1
Lo-ROX（50×）	按机器品牌与型号添加
DNA	1（10 - 40 ng）
ddH2O	补足至10 μl

 

仪器型号对Lo-ROX添加的要求：
仪器	终浓度
ABI PRISM 7000 /7300 /7700 /7900HT /Step One	5×(即：Lo-ROX 1μl /10μl体系)
ABI 7500 /7500 Fast； Stratagene Mx3000P /Mx3005P /Mx4000	1×(即：Lo-ROX 0.2μl /10μl体系)
Roche仪器； Bio-Rad仪器； Eppendorf仪器	无需添加

 

反应条件：
项目	温度	时间	循环数
预变性	95 ℃	5 min	1
变性	95 ℃	10 sec	40
退火/延伸	60 ℃	30 sec

 


3. 操作过程：
1.1         试剂准备：试剂盒从-20℃冰箱取出，室温融化；涡旋仪混匀，瞬时离心待用。
1.2         用量计算：根据需要检测的样本数n，配置n+1个反应体系混合液。即5(n+1)μl RealFAST-Probe PCR mix、(n+1)μl Primer&Probe premix （rs1065852）、0.2(n+1)μl  Lo-ROX（50×）、2.8(n+1)μl ddH₂O。（若反应数较大，可适当增加几个反应）
1.3         反应混合液配制：将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中，涡旋仪混匀，瞬时离心。（若反应数较大，可选用较大EP管。请务必旋窝混匀！）
1.4         添加反应混合液：按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排（或96孔板）。
1.5         添加模版：将1μl已经定量并稀释至10 - 40 ng/μl 的DNA模板加入分装的反应体系中。
1.6         瞬时离心：八联排（或96孔板）盖上管盖（或封膜），瞬时离心，使DNA模板与反应体系混合并处于管底。（请务必进行瞬时离心，否则可能出现无扩增的结果！）
1.7         上机：将八联排（或96孔板）放入ABI7500PCR仪，根据反应条件设置ABI 7500软件，开机运行。（请根据选用的机型进行相关设置）
1.8         特别说明：配置体系过程中，需要戴一次性乳胶手套（或PE手套）；避免接触管盖（或封膜），防止污染，导致荧光信号不准确。
 


常见问题：
 1. 存储条件与反复冻融如何选择？
该产品-20 ℃条件下可以存储6个月；2-8 ℃可以存储1周。组分A、B、C均不能反复冻融，融化后不建议再次冻存。
2. 反应体系的确认？
该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系，建议自行验证后在进行大量样本的检测。
3. 反应条件是否可以改动？
本试剂盒的反应条件根据多种参数确定，并适用于10 μl反应体系，为确保实验数据的准确性，不建议改动。
4. 机器设备的适用与选择？
该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪，但注意Lo-ROX的添加有所不同，请严格按照说明书执行。
5. 新学习的用户，常常出现无扩增？
该实验为精细实验，对操作要求较高，请注意严格按照说明书执行。尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率，可选择加倍反应体系，以20 μl体系进行初步学习。
6. 扩增曲线荧光信号很弱，或扩增曲线呈锯齿状？
这个问题可能有多种原因造成，常见原因及解决办法见下表。

原因	解决办法
检测光谱设定误差	不同荧光定量PCR仪的检测光谱范围有差异，根据所用的仪器型号设置检测的荧光信号范围。
荧光采集时间太短	扩增曲线锯齿状较明显时，将延伸时间设定为45 - 60 sec可得到改善。
目标DNA的拷贝数过少	目标DNA拷贝数只有几倍到几十倍时，容易形成线性混乱，提高样品浓度再进行反应。
样本浓度过低或严重降解	更换高浓度样本或质量更好样本进行实验。

 

弗元生物是国家高新技术企业、上海市科委认定的科技型企业，致力于打造具有国际影响力的生物医学品牌。公司以干细胞与再生医学研究为核心，业务经营范围辐射生物医学领域的多个相关学科。团队拥有自主研发的核心知识产权，在国际期刊杂志发表论文8篇，中文核心期刊发表论文1篇，申请国家发明专利7项，已获得授权的实用新型专利2项，拥有注册商标9项。

    生命科学部，已经形成以无血清培养基、肝类器官分化试剂盒为旗帜产品的充质干细胞、再生医学与器官发育等多个产品系列；肝类器官分化试剂盒为国内开创性肝类器官产品；产品已获得nature communications、cell proliferation、stem cell research and therapy等杂志文献引用。技术服务部，服务了多家知名企业和科研机构，在再生医学的基础和转化研究完善了服务体系。