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文献和实验
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库存 :999
英文名 :Klenow Fragment(exo-)
保质期 :1年
供应商 :上海酶联生物科技有限公司
保存条件 :避光低温保存
规格 :1000U
Klenow Fragment(exo-)描述:
Klenow 片段(3´→5´ exo-)是 DNA 聚合酶 I 的 N末端截短物,它保留了 DNA 聚合酶活性,但失去了 5´→3´核酸外切酶活性。该酶进一步经突变(D355A,E357A)去除了其 3´→5´的核酸外切酶活性。因此该 DNA 聚合酶无任何外切酶活性,仅包含了 DNA 聚合酶活性,广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。
单位定义
一个活力单位即在 37°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmoldNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容 PCR Buffer 和内切酶Buffer。
应用:
(1)用随机引物制备探针
(2)随机引物法标记
(3)cDNA 第二条链的合成
(4)该酶不能用于产物平端不齐
失活:75°C,20min 失活。
储存:-20℃可保存 3 年。
随机引物生物素标记反应
1. 按以下组分配制反应液
95°C 5min 冰上放置 5min。
2. 聚合反应
加入 1 μl Klenow Fragment(exo-),混合均匀。37°C 反应 15min,75°C 20min 失活。
上海酶联生物科技有限公司
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金牌会员
入驻年限:4年