T7 耐热RNA聚合酶2.0(高浓度)

库存 ：999

英文名 ：T7 耐热RNA聚合酶2.0(高浓度)

保质期 ：1年

供应商 ：上海酶联生物科技有限公司

保存条件 ：避光低温保存

规格 ：50KU

T7 耐热RNA聚合酶2.0（高浓度）
描述：
T7 耐热 RNA 聚合酶 2.0 是一种经基因工程改造的 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子（TAATACGACT CACTATAG）具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行体外转录。T7 耐热 RNA 聚合酶 2.0 可在 37-52℃条件下进行高效的体外转录，佳温度为 37℃，50℃反应条件下，仍然保留 50%以上的活性（野生型在此温度下无活性）。这种高温的反应特性有益于以下几个方面的实验：（1）提升了 GC 含量较高 RNA 的转录效率；（2）提升了长片段 RNA 的合成能力；（3）在使用帽类似物时，提高了共转录的加帽效率；（4）减少了 dsRNA 副产物的形成，降低了合成 RNA 的免疫原性。



活性定义：在标准反应体系下，50℃ 1 小时内将 1 nmol的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。1X T7 Transcription Buffer：40 mM Tris (pH 7.8), 20 mMNaCl, 18mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 

酶储存液：10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 

储存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反复冻融。 

热失活：75°C，10min。

操作方法 
1.配制反应体系
2. 50℃孵育 1-3h。 
3. 使用 RNaseFree DnaseI 去除 DNA 模板（可选）在体外转录反应结束后，向上述 20μl 反应液中加入5μl 的 10×RD Buffer 和 2μl RNaseFree DnaseI(10U/μl)，并加入 23μl 的 Rnase Free H2O 至 50μl，37℃孵育15min。 
4. 转录产物的纯化体外转录产物可选用 5minRNA 纯化试剂盒进行柱式纯化，以去除多余的盐、蛋白等杂质。也可以采用经典的LiCl 沉淀法

注意事项 
1. 转录DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。 
2. 转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RnaseA会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为佳模板。 
3. 该酶对高浓度 NaCl 或 KCl 不耐受，当其浓度高于150mM 时，其活性受到显著抑制（~50%）。 
4. 在 20μl 反应体系中加入 0.02U 热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量（提高 25~50%）。