HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH6.7)

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英文名 ：HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH6.7)

保质期 ：1年

供应商 ：上海酶联生物科技有限公司

保存条件 ：避光低温保存

规格 ：100ml

HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH6.7)
        
产品简介：
外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。2×HEPES 缓冲盐溶液主要用于磷酸钙转染，其主要成分为 HEPES，HEPES 是一种非离子两性缓冲剂，能有效控制 pH 在 6.8～8.2 范围，尤其在 pH7.2 ～ 7.4 具有较的缓冲能力，终浓度一般为 10 ～ 50mmol/L ，培养液内含 20mmol/LHEPES 即可达到较的缓冲能力。

HEPES 缓冲盐溶液(2×HeBS)是一种常用的细胞转染溶液，主要由 HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成，其适 pH 值为 6.7，经过滤除菌处理。影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中 DNA 含量、DNA 在细胞上停留的时间、休克时间。2×HeBS 要求DNA 浓度在 10～50μg 为宜，Hela、BALB 等细胞沉淀放置 16h，CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。


        
自备材料：
1、胰蛋白酶消化液
2、PBS
3、无菌水
4、CaCl2 溶液
5、甘油或 DMSO
6、筛选药物

操作步骤(仅供参考)：
1、在转染前 24h 用蛋白酶消化培养细胞，取适量数期细胞转移至新的培养器皿中，使细胞
在转染时生长状态良。
2、在加入 DNA 之前 2～4h，按 9ml/10cm 培养皿的比例加入完全培养液，置于 37℃ 5%
CO2 培养箱培养。
3、取适量乙醇沉淀的 DNA 溶解于 450μl 无菌水中，加入 50μl 2.5M CaCl2，并充分混匀，
使Ca2+终浓度达到 0.25M。
4、用移液器一边吹打 2×HeBS，一边逐滴加入配制的 DNA/CaCl2 溶液(操作应迅速，一
般在 30～60s)，并剧烈振荡 5s，室温下静置 20～30min 以形成沉淀。
5、取沉淀均匀加入到培养皿细胞中，轻轻晃动使沉淀于培养液充分混匀，置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4～16h。如果培养细胞为 CHO、DUKX 等，可以 DMSO 或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加。即培养 4～6h 后，用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO 的完全培养液替换当前培养液，室温下静置 3min，加 5ml PBS 摇动混匀。
6、去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 5～10ml 完全培养液继续培养。
7、对于瞬时转染，在转染的不同时间点内收集细胞并检测，一般时间多控制在 12～60h
以内。
8、对于稳定转染，转染后在非选择性培养液培养 18～48h，一般时间多控制在 24～36h，
以便外源基因表达。
9、用胰蛋白酶消化细胞并传代，更换适当的选择培养液继续培养，没 2～4d 更换一次选择培养液，一般 10～14d 会出现目的细胞克隆。

注意事项：
1、注意无菌操作，尽量避免污染。
2、对于瞬时转染，可以不用乙醇沉淀的 DNA。
3、休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
4、转染 12～24h 后，可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。
5、该试剂用于转染时应检测其转染效率，的转染效率应介于 30～60%之间。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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