Sulfo-Cy5-E Maleimide（磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚胺）价格

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英文名：Sulfo-Cy5-E Maleimide

CAS号：/

保质期：一年

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

保存条件：-20

规格：1mg

产品说明书
Sulfo-Cy5-E Maleimide（磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚胺）
产品货号：1 mg
产品规格：XY0068
应用范围：荧光标记染料、巯基标记染料

产品参数
外观：可溶于水、DMSO 或 DMF 的黑绿色固体
Ex/Em：647/665 nm
分子式：C39H46N4O9S2
分子量：778.9
消光系数：271,000
效能等同于：Alexa Fluor 657，TRITC，DyLight 640 等
分子结构图：

储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。

产品介绍
花菁染料 Sulfo-Cy5-E 是一种远红外荧光标记染料，该
染料具有高度亲水性和水溶性，含有游离的、未活化的单官
能团羧酸。而 Sulfo-Cy5-E Maleimide 是 Sulfo-Cy5-E 染料的
硫醇反应形式。Maleimide 与硫醇基团反应形成硫醚偶联产
物。反应可以在 pH=7 的胺中进行。在中性 pH 环境中，
Maleimide 基团不与组氨酸或精氨酸反应。
菁染料是性能优良的荧光染料，摩尔吸光系数在荧光染
料中是无可比拟的，其琥珀酰亚胺酯是常用的脂肪氨基标记
试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和
检测。通过改变次甲基链的长度，可改变其荧光发射波长，
每增加一个双键，按照 Huoffman 规则正好红移约 100 nm。
水溶性菁染料 Cy3 和 Cy5 已成为基因芯片的普遍荧光
标记物；另外，Cy5，Cy5.5 和 Cy7 的吸收在近红外区背景
非常低，是荧光强度较高、稳定性较好的长波长染料。特别
适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。

使用方法（以标记IgG抗体为例）
1. 实验材料
（1）无水 DMSO
（2）10-100 mM 磷酸盐（例如 PBS），Tris 或 HEPES 缓冲
液，pH 7.0-7.5
（3）交联葡聚糖 G-25
（4）（可选）用 Tris-(2-carboxyethyl) phosphine（TCEP）还
原蛋白质中二硫键以产生游离巯基。
（5）NaN3
（6）BSA
2. 标记方法和步骤
（1）准备标记抗体
a. 在室温下，将抗体溶于缓冲液中，使终浓度为 50-100 μM
（IgG为 7.5-15 mg/mL）。
b. 任选步骤：如果要让蛋白质中的二硫键释放出更多的硫
醇基团，则可以在此阶段加入约10倍摩尔数的过量的TCEP。
将反应溶液孵育约 30 min。还原反应和随后的标记反应最好
在惰性气体（N2或 Ar）存在下进行，以防止二硫键重新形
成。
（2）准备染料储备液
取出 Sulfo-Cy5-E Maleimide 染料，恢复至室温。制备
10 mM 染料储液。对于 1 μmol 染料：向小瓶中加入 100 μL
无水 DMSO 即可。短暂涡旋，完全溶解染料，然后进行短
时间离心，使染料集中于管子底部。
注： a. 如果要用少量的蛋白质进行标记反应，染料储备溶液
可能需要稀释至更低浓度，以保证量取体积的准确性。
b. 未使用的储液可避光、干燥储存于-20℃，以备后续
使用。如果使用无水 DMSO 制备溶液，染料可稳定至少一
个月。
c. 染料储备溶液也可以用 ddH2O 或含水缓冲液中制备。
然而，因为染料会随着时间的推移而水解，所以水溶性的储
存液需要现配现用，不能保存后再使用。
（3）标记反应步骤
a. 在搅拌或涡旋蛋白质溶液的同时，加入一定量的染料储
备溶液，以产生染料、蛋白摩尔比为 10-20 的混合液。例如，
对于 50 μM 的 IgG，应添加染料至染料最终浓度为 0.5-1 mM。
b. 在室温下避光搅拌反应2h或 4℃过夜。
注：进行标记反应的同时，进行步骤（4）a制备葡聚糖柱。
（4）从反应液中分离标记蛋白
a. 用 PBS 缓冲液（pH~7.4）平衡葡聚糖柱（10 mm × 300
mm）。
b. 将步骤（3）b 中的反应溶液装载到柱上，并用 PBS 缓冲
液洗脱柱。从柱中洗脱的第一条带对应于抗体缀合物。
注：对于小规模的标记反应，为了避免产物过度稀释，可以
使用超滤装置去除结合物中游离染料。10K 超滤管可用于
IgG蛋白；具有不同分子量的蛋白需要不同的超滤管。

3. 确定 DOL
（1）确定蛋白浓度
染料标记的抗体浓度可通过以下公式计算:
C(mg/mL) = {[A280 -(Amax × Cf)]/1.4} × 稀释因子。
a. C 是指实验收集的 YF 标记的抗体浓度；
b. 稀释因子是指在吸光度测量时的稀释倍数；
c. A280和Amax分别是指在280nm处的吸光度以及在最大吸收
波长(~647nm)处的吸光度；
d. Cf 是校正因子，Sulfo-Cy5-E Maleimide的Cf值为0.13；
e. 1.4则是指IgG的消光系数；
注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大，
因此需要稀释到大约0.1 mg/mL。稀释倍数（即稀释因子）
需要从起初抗体数量（比如5 mg）以及收集的洗脱蛋白液的
体积来进行预估。
（2）DOL的估算
DOL通过下式计算:
DOL = (Amax × Mwt × 稀释因子)/(ε × C)
a. Amax，稀释因子，C值在3.1中已经明确；
b. Mwt是指IgG的分子量（~150,000）；
c. ε是Sulfo-Cy5-E Maleimide的摩尔吸光系数。

注意事项
1. 产物如需长期储存，我们建议添加BSA和NaN3，并使其
终浓度分别为5-10 mg/mL和0.01-0.03%，以防变性和微生物
污染。
2. 标记好的抗体溶液应4℃避光保存，如果加入终浓度为50%
的甘油，则可储存在-20℃，在这些条件下，产物可稳定保存
一年或更长时间。
本产品仅用于科研。
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