YF488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒

库存 ：100

英文名 ：YF488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ

CAS号 ：/

保质期 ：一年

供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司

保存条件 ：-20

规格 ：10T/50T/100T

产 品 说 明 书
YF488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ细胞凋亡试剂盒
产品货号：XY6102S, XY6102L
产品规格：50T, 100T
产品内容：
组分 Y6102S (10T) Y6102M（50T） Y6102L (100T)
A. 1 × Annexin V 结合缓冲液 10 mL 50 mL 50 mL×2
B. YF488-Annexin V 50 μL 250 μL 500 μL
C. RedNucleus II 100 μL 500 μL 1 mL
储存条件
4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。
光谱特性
YF488-Annexin V：Abs/Em=490/515 nm
RedNucleus II：Ex/Em=635/695 nm

产品介绍
YF488-Annexin V和RedNucleus II凋亡试剂盒提供了
一种快速简便的方法，通过标记早期凋亡细胞（绿色）和晚
期凋亡细胞（红色），用于检测细胞凋亡水平。产品可以使
用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
YF488-Annexin V 可以标记早期凋亡细胞。 Annexin V
选择性结合磷酯酰丝氨酸（phosphatidylserine，简称 PS）。
在细胞发生早期凋亡时，PS 会外翻到细胞膜外侧。用绿色
荧光探针 YF488标记的Annexin V， 即YF®488-Annexin V，
可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸， 从而检测细胞凋亡的重要特
征。YF488 染料与 FITC 相比，荧光亮度更高，且不受环
境中 pH的影响，光稳定性好。
RedNucleus II 是一种非渗透性的远红光 DNA 结合染
料，不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜，但是可
以快速染色晚凋和死亡细胞中的细胞核/dsDNA。与
YF488-Annexin V 联用时，RedNucleus II 被排除在活细胞
和 早 期 凋 亡 细 胞 外 ， 而 晚 期 凋 亡 细 胞 则 同 时 被
YF488-Annexin V和 RedNucleus II结合染色呈现双阳性。
YF488 与 RedNucleus II 之间光谱无交叉，对于无自
发荧光、自带 RFP 或阿霉素诱导凋亡的细胞，都无需补偿
调节。
使用方法
下列实验方案以利用星形孢菌素诱导 Jurkat 细胞凋亡
为例，如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞，实验条件需
要略作调整。
1. 流式细胞检测
（1）根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经
处理的细胞样品，作为阴性对照。
（2）收集细胞。
悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min 收集细胞；
贴壁细胞： 用不含 EDTA 的胰酶消化， 然后300 g， 4℃
离心5 min 收集细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引起假
阳性。
注： 用胰蛋白酶消化后可使细胞在最佳培养条件和培养
基中恢复约30 min，然后再染色。胰蛋白酶消化会暂时破坏
质膜，允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质
表面上，从而导致假阳性染色。
（3）用预冷的PBS洗涤细胞两次，每次均在300 g，4℃ 下
离心5 min，收集1-5×105
个细胞并用100 μL 1 × Annexin V
结合缓冲液重悬细胞。
（4）每管加入4-5 μL的 YF®488 -Annexin V和5 μL的
RedNucleus II 工作液。
注：我们推荐额外准备三管凋亡诱导的细胞，一管不加染
料，调节FSC、SSC电压，另外两管中分别加入一种染料
（YF488-Annexin V 或 RedNucleus II），用于通道电压
调节。
（5）室温避光孵育15-20 min，为避免影响细胞凋亡进程，
孵育过程可在冰上进行。
（6）孵育结束后，每管加入400 μL的PBS或1 × Annexin V
结合缓冲液，尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
YF488-Annexin V由488 nm 激光激发，检测荧光发射光谱
在530 nm 处（FITC 通道），RedNucleus II 通道发射光谱
约在695 nm 处，可选择 FL4/RL1 通道。（注：可根据不
同凋亡处理以及不同细胞选择PBS或1 × Annexin V结合缓
冲液进行重悬）。
2. 荧光显微镜检测
对于悬浮细胞，可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。
（1）在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。
（2）根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经
处理的细胞样品，作为阴性对照。
（3）用PBS洗涤细胞。
注：细胞收集后如果不用 PBS 清洗，可以用含血清的培
养基直接替代1 × Annexin V结合缓冲液， 但是使用浓度需要
重新优化。
（4）每100 μL的1× Annexin V结合缓冲液中加入5-25 μL的
YF®488 -Annexin V和5 μL的RedNucleus II。
注：最佳使用浓度由具体实验要求确定。
（5）向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞，室温避
光孵育15-30 min。为避免影响细胞凋亡进程，孵育过程可在
冰上进行，但孵育时间至少延长至30 min。
（6）用1 × Annexin V结合缓冲液清洗细胞。
（7）将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上，载玻片可提前
加一滴1 × Annexin V结合缓冲液；对于培养在小室内的细
胞，可直接加入足量的1 × Annexin V结合缓冲液覆盖细胞。
（8）使用合适的滤光片观察细胞。YF®488-Annexin V可用
FITC适用的滤光片，RedNucleus II可用Cy 5.5适用的滤光
片。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注
意避光，以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研。
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