Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒

库存 ：100

英文名 ：Biotin TUNEL

CAS号 ：/

保质期 ：一年

供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司

保存条件 ：-20

规格 ：20T/50T

产  品  说  明  书 
Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒 
产品货号：XY6068S, XY6068L 
产品规格：20T, 50T 
产品内容： 
规格 
组分                     
   XY6068S（20T）     XY6068L（50T） 
A. Biotin TUNEL Reaction Buffer  1 mL  2 ×  1.25 mL 
B. TdT酶  20 μL  50 μL 
C. Streptavidin-HRP  20 μL  50 μL 
D. Streptavidin-HRP稀释液  1 mL  2×1.25 mL 
E. DAB显色液A  100 μL  250 μL 
F. DAB显色液B  1 mL  2×1.25 mL 
G. DAB显色液C  50 μL  125 μL 
H. Proteinase K (2 mg/mL) 
40 μL  100 μL 
I. DNase I (2 U/μL) 
5 μL  13 μL 
J. 10 × DNase I Buffer 
100 μL  260 μL 
 储存条件 
本产品应置于-20℃储存，组分A、E、G 需避光，避免
反复冻融。有效期见外包装。注：组分 A、E、F、G使用时
请佩戴口罩、手套，接触皮肤，请立即用大量水冲洗。 
 
产品介绍 
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解，
这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的 DNA片
段约为 180 bp-200 bp 的整数倍，表现为琼脂糖凝胶电泳中
呈现特异的梯状 Ladder 图谱，本试剂盒采用 TUNEL法，应
用末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl 
Transferase, TdT）在凋亡细胞断裂 DNA的 3´ -OH 末端催化
掺入生物素（Biotin）标记的 dUTP (Biotin-X-dUTP)。随后和
辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)
特异结合，最后在 HRP 的催化下通过 DAB 显色来显示凋
亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜观察并计数凋亡细胞。
由于正常的或正在增值的细胞几乎没有 DNA的断裂，因而
没有 3´ -OH  形成，很少能被染色。TUNEL法可以选择性的
对凋亡细胞直接进行原位检测，而非坏死细胞或因辐照和药
物治疗而造成的 DNA链断裂的细胞，是一种更快速、直接
的检测手段。 
 使用方法 
实验材料（自备） 
  PBS 缓冲液（pH~7.4） 
  4%多-聚甲醛（PBS 配制） 
  PBS 配制0.3% H2O2（新鲜配制） 
  70%乙醇（自选） 
  脱蜡溶剂（石蜡切片样本） 
 实验步骤 
1. 样本准备： 
（1）细胞样品 
a.  可选：准备一份阴性对照样本（加入不含TdT酶的TUNEL
反应液）。 
b. PBS 清洗细胞两次。 
c.  细胞固定：加入适量 4%多-聚甲醛（pH 7.4）溶液，4℃放
置 30 min。 
d. PBS 清洗细胞两次。 
e.  通透细胞：细胞可用配制于 PBS 中的0.2% Triton X-100
溶液通透，室温放置 20 min。 
f. PBS 清洗细胞两次。 
g.  封闭细胞：每孔加入100 μL左右的配制于PBS中的0.3 % 
H2O2溶液，轻敲孔板使其充分覆盖细胞，室温避光封闭 30 
min，用 1×PBS 清洗细胞2 次； 
（2）石蜡组织切片 
a.  室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2 次，每次5 min，   以
彻底脱掉石蜡。 
注：二甲苯有毒，易挥发，请在通风橱中进行此操作。 
b.  室温下，将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗 2 次，每次5 
min。 
c.  室温下，将切片样本连续浸没在不同浓度梯度的乙醇
（95%、90%、80%、70%）中，每种浓度各漂洗 1 次，每次
5 min。 
d.  室温下，将切片浸没于纯水中漂洗 3 min，再将切片浸没
于 1×PBS 中漂洗 3 min，用滤纸小心吸干切片样本周围液
体。 
e.  用免疫组化笔围描绘样品轮廓，以便下游通透与标记。 
f.  按 1: 100 的比例，将2 mg/mL的蛋白酶 K 溶液用 1 × PBS
稀释至终浓度 20 µg/mL，在每个样本上滴加 100 µL，使溶
液覆盖全部样本区域，室温孵育 20 min（蛋白酶 K 的孵育
时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化）。 
注：蛋白酶 K 可以帮助渗透组织， 时间短达不到通透效果，
但延长孵育时间可能导致切片脱落。一般情况下，厚度 4 µ m
孵育 10 min，厚度30 µ m孵育 30 min。 
g. PBS 浸润清洗切片两次，每次 5 min。 
h.  封闭：加入适量配制于 PBS 中的 0.3% H2O2溶液（新鲜
配制），室温孵育 30 min，以灭活切片内源的过氧化氢酶。  
i. PBS 浸润清洗切片两次，每次 5 min，用滤纸吸去多余的
液体，将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。 
（3）冰冻组织切片 
a.  将冰冻切片放置于室温的片架上，室温 20 min，晾干。 
b.  将载玻片浸没在 4%多-聚甲-醛溶液中，室温固定 30 min。  
c. PBS 浸润清洗切片两次，每次 5 min。 
d.  用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。 
e.  按 1:100 的比例，将2 mg/mL的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
稀释至终浓度 20 µg/mL。每个样本上滴加 100 µL，使溶液
覆盖全部样本区域，室温孵育 10 min（Proteinase K  的孵育
时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化）。 
注：蛋白酶 K 可以帮助渗透组织， 时间短达不到通透效果，
但延长孵育时间可能导致切片脱落。一般情况下，厚度 4 µ m
孵育 10 min，厚度30 µ m孵育 30 min。 
f. PBS 浸润清洗切片两次，每次 5 min。 
g.  封闭：加入适量配制于 PBS 中的 0.3% H2O2溶液（新鲜
配制），室温孵育 30 min，以灭活切片内源的过氧化氢酶。  
h. PBS 清洗样品 3 次，每次5min，用滤纸吸去多余的液体，
将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。 
（4）阳性处理（仅阳性对照进行此步骤，其他样品直接进
行 TUNEL反应步骤） 
a.  按 1:10 的比例用 diH2O将 10× DNase I Buffer 稀释成 1 × 
DNase I Buffer 备用。 
b.  滴加100 µL 1× DNase I Buffer 到已通透的样本上，室温
平衡 5 min。 
c.  用 1× DNase I Buffer  以 1:100 稀释 DNase I (2 U/μL)，使
其为终浓度 20 U/mL的工作液。 
d.  轻轻吸掉多余液体，加入100 μL浓度为 20 U/mL DNase 
I 工作液，室温孵育 10 min。 
e.  轻轻吸掉多余液体，PBS 清洗样品 2 次。  
2. TUNEL 反应 
（1）配制 TUNEL反应液（即用即配）： 
  1 个样品  5 个样品  10 个样品 
TdT酶  1 μL  5 μL  10 μL 
Biotin TUNEL 
Reaction Buffer 
49 μL  245 μL  490 μL 
TUNEL反应 
液总体积 
50 μL  250 μL  500 μL 
（2）每个样品加入 50 μL TUNEL 反应液，37℃避光孵育 60 
min，组织样本需要 2 h（阴性对照样品加入不含 TdT 酶的
TUNEL反应液）。   
注：50 μL Streptavidin-HRP 工作液适合涂片、切片或 96 孔
板、48 孔板、24 孔板或 12 孔板的一个孔，如果是 6 孔板，
建议使用 100 μL。为防止 Streptavidin-HRP 工作液蒸发，建
议在样品上覆上防蒸发膜。 
（3）PBS 清洗反应后的样品3次，每次 5 min。 
3. Streptavidin-HRP 工作液和 DAB 显色液的配制 
（1）Streptavidin-HRP 工作液的配制（即用即配）： 
  1 个样品  5 个样品  10 个样品 
Streptavidin-HRP  1 μL  5 μL  10 μL 
Streptavidin-HRP 
稀释液 
49 μL  245 μL  490 μL 
Streptavidin-HRP 
工作液总体积 
50 μL  250 μL  500 μL 
（2）DAB 显色液的配制（即用即配）： 
  1 个样品  5 个样品  10 个样品 
DAB显色液A  5 μL  25 μL  50 μL 
DAB显色液B  42.5 μL  212.5 μL  425 μL 
DAB显色液C  2.5 μL  12.5 μL  25 μL 
DAB 显色液总体积  50 μL  250 μL  500 μL 
4. 样品显色 
（1）向样品滴加 50 μL Streptavidin-HRP 工作液，37℃避光
孵育 30 min。 
注：50 μL Streptavidin-HRP 工作液适合涂片、切片或 96 孔
板、48 孔板、24 孔板或 12 孔板的一个孔，如果是 6 孔板，
建议使用 100 μL。为防止 Streptavidin-HRP 工作液蒸发，建
议在样品上覆上防蒸发膜。 
（2）PBS 清洗样品 3 次，每次 5 min。   
（3）向样品滴加 50 μL DAB 显色液，室温孵育 5-30 min 或
在显微镜下根据颜色的发展情况掌握染色时间。 
注：如果显色很强可短于5 min即停止显色，如果显色很弱，
可以适当延长显色时间，甚至显色过夜。 
（4）PBS 清洗样品 3 次，每次 5 min。 
（5）选做：用苏木素染色液或甲基绿染色液进行细胞核染
色。随后用PBS 清洗3 次。   
（6）直接光学显微镜下观察。针对石蜡切片，如果需要封
片，使用 95%乙醇脱水 5 min，再用 100%乙醇脱水 2 次，
每次 3 min，再用二甲苯透明 2次，每次 5 min。 
 
注意事项 
1.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。  
2.  叠-氮-化钠对 HRP 有抑制作用，实验中请勿使用含有叠
氮-化钠的试剂。
本产品仅用于科研。
相关产品 ：

转基因水稻LLRICE62检测试剂盒(荧光-PCR法)

转基因水稻LLRICE601检测试剂盒(荧光-PCR法)

转基因植物PAT基因检测试剂盒(荧光-PCR法)

转基因植物NPTII基因检测试剂盒(荧光-PCR法)

转基因植物Bar基因检测试剂盒(荧光-PCR法)

转基因植物Cry1A(c)基因检测试剂盒(荧光-PCR法)

玉米内源基因IVR检测试剂盒(荧光-PCR法)

植物内源基因tRNA-Leu检测试剂盒(荧光-PCR法)

大豆内源基因Lectin检测试剂盒(荧光-PCR法)

水稻内源基因SPS 检测试剂盒(荧光-PCR法)

麦ubiquitine 基因检测试剂盒(荧光-PCR法)

人乳清蛋白（hLALBA）转基因成分检测试剂盒(荧光-PCR法)

人溶菌酶（hLYZ）转基因成分检测试剂盒(荧光-PCR法)