YF488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

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保质期 ：一年

供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司

保存条件 ：-20

规格 ：10T/50T/100T

产 品 说 明 书
YF488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
产品货号：XY6002S, XY6002M, XY6002L
产品规格：10T, 50T, 100T
产品内容：
组分 规格 XY6002S（10T）XY6002M（50T）XY6002L（100T）
A. 1×Annexin V 结合缓冲液 10 mL 50 mL 50 mL×2
B. YF488-Annexin V 50 μL 250 μL 500 μL
C. PI 100 μL 500 μL 1 mL
储存条件
4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。
光谱特性
YF488-Annexin V: Ex/Em = 490/515 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍
YF488-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简
便的方法，通过标记早期凋亡细胞（绿色）和坏死细胞（红
色），用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或
其它荧光检测设备进行检测。
YF488-Annexin V 可以标记凋亡细胞。 Annexin V 选择
性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称 PS)。在细胞
发生早期凋亡时，磷酯酰丝氨酸会外翻到细胞表面，即细胞
膜外侧。用绿色荧光探针 YF®488 标记的 Annexin V，即
YF®488-Annexin V，可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸，从而检
测细胞凋亡的重要特征。我们公司的 YF®488染料与荧光素
/FITC 相比，荧光亮度更高，且不受环境中 pH的影响，具
有良好的光稳定性。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种 DNA 结合染
料， 它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细
胞的细胞核。PI 可以由 488，532 或 546 nm 的激光激发，
呈现红色荧光。
使用方法
下列实验方案以星形孢菌素诱导 Jurkat 细胞凋亡为例， 如果
使用其他诱导剂和其他类型的细胞，实验条件需要调整。
1．流式细胞检测
（1）根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经
处理的细胞样品，作为阴性对照；一组样品做单染，用于调
节补偿。
（2）收集细胞。悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞；
贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后300 g，4℃离心5 min
收集细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
注：细胞用胰蛋白酶消化后，在最佳培养条件和培养基中恢
复约30 min后染色，避免假阳性。
（3）用预冷的PBS洗涤细胞两次，300 g，4℃下离心5 min，
收集1-5×105
个细胞并用100 μL 1×结合缓冲液重悬细胞。
（4）每管加入4-5 μL的YF®488-Annexin V和5 μL的PI工作
液。
注：我们推荐准备两管额外的细胞，每管只加入一种单染染
料（YF®488-Annexin V 和 PI），用于流式单染的补偿调节。
（5）室温避光孵育10-15 min，为降低细胞凋亡进程，孵育
过程可在冰上操作。
（6）每管加入400 μL的PBS或1×结合缓冲液重悬细胞（PBS
或1× 结合缓冲液的选择根据不同凋亡处理以及不同细胞具
体选择），尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
YF®488-Annexin V 由488 nm激光激发，检测荧光发射光谱
在530 nm处（FITC 通道），PI通道发射光谱约在617 nm处。
2．荧光显微镜检测
对于悬浮细胞，可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。
（1）在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。
（2）根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经
处理的细胞样品，作为阴性对照。
（3）用PBS洗涤细胞。
注：可以用含血清的培养基直接替代Annexin V结合缓冲
液，但是Annexin V的使用浓度需要重新优化。
（4）每100 μL的Annexin V结合缓冲液中加入5-25 μL的
YF®488-Annexin V和5 μL的PI。
注：最佳使用浓度由具体实验要求确定。
（5）向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞，室温避
光孵育15-30 min。为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上
操作，但孵育时间至少延长至30 min。
（6）用1×结合缓冲液清洗细胞。
（7）将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上，载玻片可提前
加一滴1×结合缓冲液；对于培养在小室内的细胞，可直接加
入足量的1×结合缓冲液覆盖细胞。
（8）使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。
YF488-Annexin V 可用 FITC 适用的滤光片，PI 可用 Cy3
或者 Texas。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧
光淬灭。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研。
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