143B人骨肉瘤细胞

细胞类型 ：细胞系

供应商 ：智立中特（武汉）生物科技有限公司

库存 ：100

英文名 ：143B

运输方式 ：顺丰派送

器官来源 ：人

细胞形态 ：混合型，成纤维与上皮样

物种来源 ：人

规格 ：1×10⁶cells/T25培养瓶

143B 人骨肉瘤细胞
规格： 1*10 6   
注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞介绍
胸苷激酶阴性(TK-)。这是一个人骨肉瘤细胞系
细胞特性
1） 来源：骨
2） 形态：混合型，成纤维与上皮样
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议1：2传代
      智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网zlzt.com是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！

我们的工作主要包括：广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种；保存用于专利程序的各种可培养生物材料；质粒载体类保藏技术研究；微生物分离、培养技术研究；微生物鉴定和复核技术研究；保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。

目前保存各类载体资源超过20000余种 ，质粒微生物约5000株，另外我们还代理国外微生物菌种资源，如addgene，安捷伦，thermo，atcc等。

信息简介如下：

Addgene是一个公益性组织，它负责保存和提供质粒。科学家发表文章如果涉及到质粒，会发一份到Addgene保存，其他科学家如果需要这个质粒，可以向Addgene索取。

ATCC成立于1925年，是世界上最大的生物资源中心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理，是一家全球性、非盈利生物标准品资源中心。ATCC向全球发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证、应用及进步。

安捷伦为基因组学领域的各种应用提供丰富的高质量工作流程解决方案。您可以找到支持或扩展实验室所需的一切，包括样品质量控制(QC)、二代测序 (NGS) 文库制备和靶向序列捕获、微阵列芯片、CRISPR、PCR/qPCR、生物试剂以及数据分析解决方案（包括解析和报告）。

Thermo Fisher Scientific 旗下 GeneArt 质粒构建服务可快速、可靠地生成具有独特应用特征的专用质粒。根据需要使用复杂的克隆方法，帮助您开发完全定制的载体，并保留与所得表达质粒相关的所有知识产权。, 如果所需质粒载体不可用，无论是从商业上还是通过您的研究网络，我们都可以为您提供帮助。GeneArt™ 基因合成平台可通过模块化、易于互换的片段编码调节和功能元件，或使用定制元件来设计质粒载体。在某些情况下，这些单独的“模块”可以通过 PCR 扩增获得，也可以通过合成产生。合成载体元件也可定制，使其囊括几乎任何已知的调节或功能元件，满足您的独特需求。

细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；0.015 mg/ml 5-溴-2'-脱氧尿苷；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3） 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。