96孔酵母质粒小提试剂盒（用于PCR及大肠杆菌转化）

库存 ：50

英文名 ：96 Well Plate for Yeast Plasmid Preps

保质期 ：两年

供应商 ：上海博尔森生物科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：2P

96孔酵母质粒小提试剂盒（用于PCR及大肠杆菌转化）

保存温度：-20℃保存，开封后根据单品储存条件储存，有效期两年。

产品内容：

产品说明：

1：酵母杂交筛库后，需要对筛选平板的菌落进行鉴定，由于酵母菌细胞壁以及拷贝数的影响，常规的菌 P方法成功率不稳定。

2：本产品在酵母质粒提取 PE051，PE052 以及阳性克隆检测试剂盒 SK2420 的基础上，致力于解决酵母PCR 成功率的问题，成功率可达 100%，并免去玻璃珠震荡带来的人力损耗，一次可以处理 192 个样品，避免了摸索 PCR 条件带来的困扰。

3：一次提取实验，约耗时 90-120min，可以得到 192 个样品的质粒 DNA。所得产物可以满足 PCR 以及大肠杆菌转化实验。

4：本产品提供的酵母培养基为亮氨酸缺陷培养基，适用于 pGADT7 以及 pGADT7-REC 等 leu 筛选标记的质粒菌的扩繁。

实验准备：

1：产品储存：收到产品后，将 96 孔培养板（含 SD-leu 培养基）和提取液置于 4℃冰箱；将酶解液置于-20℃冰箱；其他成分置于室温保存。

2：酵母菌扩繁：将 96 孔培养板（含 SD-leu 培养基）置于超净台中，将平板菌落分别接种于 96 孔中。盖好硅胶盖。于 28-30℃培养至培养基变浑浊（OD 值大于 0.5，约需要培养 12-24 小时）。

提取步骤一（酶解）：

1. 将酶解液置于 37℃溶解（未用完的酶解液可以置于 4℃保存一周，或者-20℃长期保存）。

2. 离心沉淀 96 孔培养板培养所得酵母细胞（根据离心机转调整离心时间至酵母菌完全沉淀）。

3. 在 96 孔培养板每孔加入 200μL 的酶解液重悬酵母菌沉淀，于 37℃摇床（200-250rmp/min）孵育 60min。

注意：30min 时观察一下酵母菌是否沉淀，如沉淀震荡重悬。酶解时间可以延长（2-16h），不影响提取结果。

提取步骤二（裂解）：

1. 将提取液置于 65℃水浴预热备用。

2. 酶解完成后，每孔酶解产物中加入 600μL 的提取液（此时酶解产物会变澄清，总体积为 800μL）。

提取步骤三（纯化）：

1. 准备 96 孔质粒纯化板，置于 96 孔质粒回收板上（暂放，后续回收板用于质粒回收用）。

2. 将裂解产物（每孔 800μL）加入吸附柱中，将 96 孔质粒纯化板转移到用过的 96 孔培养板上（用于废液回收），室温静置 2min。

3. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min），弃穿透液。

4. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）每孔加入 600μL 洗涤液用最高转速离心（例如 4000rmp/min离心 5min），弃穿透液。

5. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min），甩干残留液体。

提取步骤四（收集）：

1. 此时将洗脱液置于 65-85℃水浴预热。

2. 将 96 孔质粒纯化板套于 96 孔质粒回收板上，每孔加入 50μL 的预热的洗脱液，室温静置 3min。

3. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔质粒回收板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min）。

4. 穿透液即为所得酵母质粒，取 5μL 用于 50μL 体系的 PCR 反应。取 5-10μL 用于大肠杆菌转化。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！