全血miRNA提取试剂盒

库存 ：50

英文名 ：全血miRNA提取试剂盒

保质期 ：2年

供应商 ：上海博尔森生物科技有限公司

保存条件 ：室温

规格 ：25T/100T

全血miRNA提取试剂盒

描述：全血 miRNA 提取试剂盒是目前世界上提 取小 RNA（<200nt）操作步骤最简单、重复性最好、小 RNA 产率最高的方法。使用该试剂盒提取的小 RNA（Small RNA） 中，长度在 15～200nt 范围的 RNA 在 95%以上，基本不含 有大 RNA 和 DNA。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯 度 miRNA，可在 45min 内完成小 RNA 的提取。该试剂盒适 用于冻存和新鲜的抗凝全血样本（注意该试剂盒不适用于血 清和血浆）。

操作方法：
(1) 向 1.5ml EP 管中加入 300μl miRNA Reagent A。将150μl 抗凝全血加入到上述 300μl miRNA Reagent A 中，立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置 5min 以充分裂解细胞。
(2) 向上述裂解完毕的裂解液中加入 250μl miRNA ReagentB，上下颠倒混合均匀。13,000rpm 离心 5min，吸取 550μl上清液，转移到新的 1.5ml EP 管中。
(3) 向上述溶液中加入 200μl 无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置 5min。
(5) 13,000rpm 离心 10min，转移 700μl 上清液到新的 1.5mlEP 管中。
(6) 向上述溶液中加入 300μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
(7) 分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。
(8) 向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。
(9) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。
(10) 吸附柱 13,000rpm 空离心 2min，去掉残留的乙醇。
(11) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中，室温放置 2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl RnaseFree TEBuffer，室温静置 2min，13,000rpm 离心 2min，洗脱产物即为提取的 miRNA。（通常取 3～5μl 该产物，即可使用HG TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应。
常见问题汇总：
(1) 本方法提取的小 RNA，95％以上为小 RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt 的 RNA，通常残留的>200nt RNA不影响后续试验操作。
(2) 本试剂盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
(3) 使用本试剂盒提取的 microRNA 浓度通常在 50ng/μl 左右，取 5～10μl 即可用于电泳检测。取 3~5μl 即可用于G TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应，通常使用优化的 miR-TaqMan RealTime PCR技术。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！