SD 2.0 DNA 聚合酶（SD 2.0 DNA Polymerase）

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英文名 ：SD 2.0 DNA Polymerase

保质期 ：2年

供应商 ：上海博尔森生物科技有限公司

保存条件 ：-20°C

规格 ：200T（25 µl体系）

SD 2.0 DNA 聚合酶（SD 2.0 DNA Polymerase）

描述：SD 2.0 DNA Polymerase 为具有链置换活性的耐高 温 DNA 聚合酶，该酶专用于一步法巢式 TaqMan PCR （TaqMan One-Step Nested PCR），在搭配 HaiGene 的 P-Bond 荧光探针的情况下可实现高灵敏度的巢式定量 PCR。该酶为热启动版本，仅有在 90℃加热 5min 后才能 恢复其扩增活性。关于 TaqMan One-Step Nested PCR 技术 细节，请登录 HaiGene 网站进行浏览。

常见问题
问题 1： TaqMan One-Step Nested PCR 是否可以做定量分析？ 回答：由于采用槽式扩增系统，每个循环的倍增在 2-4 之间（在 6 引物系统中会更高），而不是传统 PCR 的 2 倍关系，因此不建议进 行定量检测。但 Nested PCR 在不同的梯度模板中仍然表现出很好 的浓度梯度关系，仍然可以通过 Ct 值判读模板的含量区间。
问题 2： 常规 TaqMan 探针能否代替 Nested P-Bond 探针？ 回答：常规 TaqMan 探针对模板的绑定能力较 P-Bond 探针差很多， 多数情况下切割效率低下，甚至不工作，因此不建议采用常规 TaqMan 探针。
问题 3： 每一条 Nested P-Bond 探针都能 100%工作吗？ 回答：由于未知的原因，目前还不能保证每条 Nested P-Bond 探针 100%工作，有个别的探针切割效率低下、甚至无信号。总体来言， Nested P-Bond 探针的成功率>80%。
问题 4： 怎样的设计才能达到单 copy 的检测水平？ 回答：在采用 6 引物扩增系统中总能获得最高的检测灵敏度，但引 物组合的筛选工作具有一定的挑战性。
问题 5： TaqMan One-Step Nested PCR 如何进行内参质控设计？ 回答：在对内源内参进行扩增时，考虑到内源内参不需要很高的灵 敏度，我们建议采用常规 2 条引物系统即可，通常内参扩增引物的 使用浓度在 100nM 的浓度即可。内源内参通常采用 ROX 荧光标记。
问题 6： TaqMan One-Step Nested PCR 如何进行多靶基因设计？ 回答：如果多靶基因设计的目标为，防止靶基因突变造成的脱靶（假 阴性），那么通过在内侧引物区域内采用 2 条探针检测即可解决脱 靶问题。如果多种病原单管检测的设计目标的话，由于使用的引物 条数大幅增加，可参考 MultiPlex 设计方案对引物系统进行优化组 合，这是具有一定挑战性的。
问题 7：TaqMan One-Step Nested PCR 可以进行直扩反应吗？ 回答：SD 2.0 DNA Polymerase 对杂质具有相当的耐受性，在 DNA 模板的检测中，可以采用粗制样品进行扩增。稍后我们会给出详细 的参数。由于 SD 3.0 DNA/RNA Polymerase 在反转录反应前，不能 加热裂解样本，所以对 RNA 的模板检测来言，TaqMan One-Step Nested RT-PCR 还不能进行粗样品的直接检测。RNA 粗制样本的直 接检测请使用我处 mTTx DNA/RNA 聚合酶系统。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！