Annexin V-FITC/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒（BestBio贝博）

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒
产品简介：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，
而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。

用标记了FITC的AnnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生，正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的。Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，
它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。将AnnexinⅤ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

产品组成：

使用方法：

1. 离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次。

3. 用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1 X 10⁶ cells/ml。

4. 在细胞悬浮液中加入5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。

5. 加入10ul PI后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育5分钟。

6. 在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

流式细胞仪分析：

经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。

使用流式细胞仪正确分析Annexin V-FITC/PI双染的细胞前要求仪器的荧光补偿来去除两种染料激发光之间的叠加。因为荧光补偿设置与PMT的电压直接相关，所以不同仪器之间的补偿不同。
建议在实验开始阶段分析经Annexin V、PI分别单染的细胞来调整荧光补偿去除光谱重叠。根据未处理细胞空白对照和经Annexin V、PI分别细胞染色后的单染对照的分析设定十字门的位置。

1. 上样未经染色的细胞，在线性FS-SS点图上显示细胞并设门圈出目标细胞群体。

2. 建立LogFL1-LogFL2（最好用FL3）双参数点图并分析以上光散射图中设门的细胞；保证>98%的细胞处于在X、Y轴Log 1为边界的左下象限中心区域。

3. 检测annexin V-FITC单染的细胞并检查FL1-FL2（或FL3）散点图，保证在左上和右上象限内没有颗粒。如果有颗粒出现在上端象限则说明有荧光渗漏；此时FL1的荧光被FL2 （或FL3）PMT检测到了。
为了纠正这种现象，增加FL1漏到FL2（或FL3）荧光的补偿%（这可能在1-5%之间）。如果这个调节没有有效地去除FL2的阳性信号，此时要降低FL2（或FL3） PMT的电压。

4. 检测PI单染的细胞并检查FL1-FL2（或FL3）散点图，保证在右上和右下象限内没有颗粒。如果有颗粒出现在右侧象限则说明有荧光渗漏；此时PI的荧光被FL1 PMT检测到了。为了纠正这种现象，
增加FL2（或FL3）漏到FL1荧光的补偿%（这可能在15-25%之间）。如果这个调节没有有效地去除FL1的阳性信号，此时要降低FL1 PMT的电压。

注：如果在以上调节补偿过程中更改了PMT的电压，建议重复3、4步骤，确保不引起过度荧光补偿。过度补偿可以从阳性细胞十分贴近从标这一现象观察出来。一个恰当的补偿应该是单阳性
细胞荧光强度与落在左下Log 1为边界象限中间阴性细胞的荧光强度一致。

5. 设定十字门的位置，FL1和FL2（或FL3）的划定方法如下：

5.1 设定FL1标尺位置: 处于左下象限内的大群细胞是Annexin V染色阴性的细胞（一般这些细胞会在FL1轴方向上升至2个对数坐标值）。将垂直的FL1标尺设定在紧靠Annexin V阴性群体右侧
0.1-0.2Log单位的地方。

5.2 设定FL2 （或FL3）标尺位置: 可以通过一定数据的双阳性细胞来区分PI+和PI-的细胞群体。在此条件下可能会识别出两群细胞，一是位于散点图的右下方（ANN+/PI-）还有就是右上方
（ANN+/PI+）。水平线可以置于这两群细胞的中间。如果在分析的细胞群体中没有PI+细胞，区分PI+细胞最好是参照双阴性细胞群体，将水平线设在双阴性细胞以上0.1-0.3 Log单位的地方。

注：在阴性群体门以外的细胞可被识为Annexin V或Annexin V和PI阳性的细胞。

荧光显微镜观察：

1. 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。

注：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。

2. 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。

储存条件：

2-8℃保存。

有效期：

一年。

注意事项：

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光。

4.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素
进行优化对实验成功与否至关重要。

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蛋白提取
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BB-3127BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒
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BB-3129BestBio贝博生物革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒
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BB-3132BestBio贝博生物土壤蛋白提取试剂盒
BB-3133BestBio贝博生物液体样本蛋白提取试剂盒
BB-31332BestBio贝博生物乳清蛋白提取试剂盒
BB-3134BestBio贝博生物白细胞蛋白提取试剂盒
BB-3135BestBio贝博生物血液单核细胞蛋白提取试剂盒
BB-3136BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒
BB-3137BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒
BB-3138BestBio贝博生物血清蛋白提取试剂盒
BB-3139BestBio贝博生物血细胞蛋白提取试剂盒
BB-3140BestBio贝博生物全血蛋白提取试剂盒
BB-31401BestBio贝博生物血小板蛋白提取试剂盒
BB-3141BestBio贝博生物厚壁微生物蛋白提取试剂盒
BB-3151BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒
BB-31511BestBio贝博生物细菌跨膜蛋白提取试剂盒
BB-31512BestBio贝博生物细菌外膜蛋白提取试剂盒
BB-3152BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒
BB-31521BestBio贝博生物植物跨膜蛋白提取试剂盒
BB-3153BestBio贝博生物昆虫膜蛋白提取试剂盒
BB-31531BestBio贝博生物昆虫跨膜蛋白提取试剂盒
BB-3154BestBio贝博生物植物核蛋白提取试剂盒
BB-3155BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒
BB-3156BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒
BB-3157BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒
BB-3158BestBio贝博生物线粒体膜蛋白提取试剂盒
BB-3159BestBio贝博生物真菌核蛋白提取试剂盒
BB-3160BestBio贝博生物大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒
BB-3161BestBio贝博生物骨组织蛋白提取试剂盒
BB-3162BestBio贝博生物高脂肪样本蛋白提取试剂盒
BB-3163BestBio贝博生物神经元蛋白提取试剂盒
BB-3164BestBio贝博生物石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒
BB-3165BestBio贝博生物甲醛固定组织蛋白提取试剂盒
BB-31651BestBio贝博生物固定细胞蛋白提取试剂盒
BB-3166BestBio贝博生物冻存样本核蛋白提取试剂盒
BB-3167BestBio贝博生物植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒
BB-3168BestBio贝博生物酵母核蛋白提取试剂盒
BB-31681BestBio贝博生物酵母核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒
BB-3169BestBio贝博生物植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒
BB-3170BestBio贝博生物藻类膜蛋白提取试剂盒
BB-3171BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒
BB-31711BestBio贝博生物组织线粒体蛋白提取试剂盒
BB-3172BestBio贝博生物植物线粒体蛋白提取试剂盒
BB-31721BestBio贝博生物丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒
BB-3173BestBio贝博生物植物线粒体膜蛋白提取试剂盒
BB-3174BestBio贝博生物细胞核膜蛋白提取试剂盒
BB-3175BestBio贝博生物植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒
BB-3176BestBio贝博生物线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒
BB-3177BestBio贝博生物组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒
BB-3178BestBio贝博生物线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒
BB-3179BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒
BB-31791BestBio贝博生物植物膜蛋白/叶绿体蛋白提取试剂盒
BB-3180BestBio贝博生物植物胞质蛋白提取试剂盒
BB-3181BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-31812BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3182BestBio贝博生物细菌总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3183BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-31836BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3184BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-31841BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3185BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3186BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3187BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3188BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3189BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3190BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3191BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3192BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3193BestBio贝博生物昆虫总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-3194BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-31951BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
BB-31961BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31962BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31963BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31964BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31965BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31966BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31967BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）
BB-31968BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）

蛋白裂解
BB-3201BestBio贝博生物RIPA裂解液（蛋白裂解液）
BB-3202BestBio贝博生物非变性蛋白裂解抽提液
BB-3203BestBio贝博生物Western细胞裂解液
BB-3204BestBio贝博生物IP细胞裂解液
BB-3205BestBio贝博生物SDS裂解液
BB-3206BestBio贝博生物NP-40裂解液
BB-3207BestBio贝博生物细胞裂解液
BB-3208BestBio贝博生物细菌裂解液
BB-32081BestBio贝博生物细菌裂解液（免超声）
BB-3209BestBio贝博生物组织裂解液
BB-3212BestBio贝博生物酵母蛋白裂解液
BB-3221BestBio贝博生物快速蛋白裂解液
BB-3222BestBio贝博生物变性蛋白裂解液
BB-3231BestBio贝博生物膜蛋白溶解液
BB-3232BestBio贝博生物包涵体溶解液
蛋白酶磷酸酶抑制剂
BB-3301BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物
BB-3302BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物（含EDTA）
BB-3303BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物（细菌蛋白提取）
BB-3304BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物（酵母真菌蛋白提取）
BB-3305BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物（植物蛋白提取）
BB-3311BestBio贝博生物磷酸酶抑制剂混合物
BB-3321BestBio贝博生物蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物
BB-3322BestBio贝博生物蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物（含EDTA）
BB-3331BestBio贝博生物金属蛋白酶抑制剂
BB-33312BestBio贝博生物钙蛋白酶抑制剂
BB-3332BestBio贝博生物木瓜蛋白酶抑制剂
BB-3333BestBio贝博生物胰蛋白酶抑制剂
BB-3334BestBio贝博生物丝氨酸蛋白酶抑制剂
BB-3335BestBio贝博生物酸性蛋白酶抑制剂
BB-3341BestBio贝博生物PMSF
BB-3342BestBio贝博生物Bestatin
BB-3343BestBio贝博生物E64
BB-3344BestBio贝博生物Pepstatin
BB-3345BestBio贝博生物AEBSF
BB-3346BestBio贝博生物Aprotinin
BB-3347BestBio贝博生物Leupeptin
BB-3351BestBio贝博生物原钒酸钠溶液(NaVO4，0.1M)（预活化）
BB-3361BestBio贝博生物酪氨酸蛋白激酶抑制剂
BB-3371BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物片剂（EDTA Free）
BB-3372BestBio贝博生物蛋白酶抑制剂混合物片剂（含EDTA）
BB-3373BestBio贝博生物磷酸酶抑制剂混合物片剂
BB-3374BestBio贝博生物蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物片剂（EDTA Free）
BB-3375BestBio贝博生物蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物片剂（含EDTA）
BB-3391BestBio贝博生物蛋白稳定剂
BB-3392BestBio贝博生物核酸去除液
BB-3393BestBio贝博生物溶菌酶
蛋白定量
BB-3401BestBio贝博生物BCA 蛋白定量试剂盒
BB-3411BestBio贝博生物Bradford 蛋白定量试剂盒
BB-3421BestBio贝博生物Lowry 蛋白定量试剂盒
BB-34212BestBio贝博生物改良Lowry法蛋白定量试剂盒
BB-3422BestBio贝博生物双缩脲蛋白定量试剂盒
BB-3431BestBio贝博生物BSA标准