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品系 :详见说明书
ATCC Number :-
细胞类型 :详见说明书
肿瘤类型 :-
CAS号 :-
供应商 :武汉赛奥斯生物
库存 :99
注册证号 :-
英文名 :-
生长状态 :详见说明书
年限 :-
运输方式 :活细胞/冻存
器官来源 :详见说明书
是否是肿瘤细胞 :-
细胞形态 :详见说明书
免疫类型 :详见说明书
物种来源 :详见说明书
相关疾病 :-
组织来源 :详见说明书
规格 :5×10⁵cells
一.细胞描述
肝星状细胞(HSC)位于Disse间隙内,紧贴着肝窦内皮细胞和肝细胞。其形态不规则,胞体呈圆形或不规则形,常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。此外,HSC还伸出胞突与肝细胞、邻近的星状细胞相接触。HSC是ECM的主要来源, HSC激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC),各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞。肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC),各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞,正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时,肝星状细胞被激活,其表型由静止型转变为激活型。激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成和肝内结构的重建,另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。(该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。)
二.细胞特性
(1)组织来源于实验动物的正常肝组织。
(2)细胞鉴定:结蛋白(Desmin)免疫荧光染色为阳性。
(3)经鉴定细胞纯度高于90%。
(4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
(5) 细胞生长方式:长梭状,星状细胞,贴壁培养。
三.推荐培养基
我们推荐使用SAIOS原代星状细胞培养体系(货号:PM-009)作为体外培养原代肝星状细胞的培养基。
名称 |
体积 |
浓度 |
保存条件 |
原代星状细胞基础培养基 |
500ml |
1× |
4℃、避光 |
原代星状细胞培养添加剂 |
5ml |
100× |
-20℃、避光 |
胎牛血清(FBS) |
50ml |
终浓度10% |
-20℃、避光 |
双抗(青霉素/链霉素,P/S) |
5ml |
100× |
-20℃、避光 |
四.运输和保存
(1)冻存细胞:1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)复苏好的活细胞:T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理:
(1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
(2)请在4或5x显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
(3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
(4)注意:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
细胞处理:
(1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
(2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面以T25瓶为例:
(1)细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
(2)1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
(3)将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存,同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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