目录号:M056-01A
产品描述:
BenzoNuclease是来源于Serratiamarcescens的非特异性核酸内切酶。利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得,蛋白不带有任何形式标签。该酶具有降解任意形式的DNA和RNA活性,包括双链、单链、线状、环状等,可将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸。
产品用途:
1)蛋白提取时去除核酸污染;
2)蛋白纯化过程中去除核酸污染;
3)疫苗及制药工业中去除宿主残留核酸;
4)Western-blot;
5)IP-Western。
使用建议:
最适温度:37℃ ;最适pH:pH8.0
反应条件:
BenzoNuclease的反应条件非常广泛:Mg2+浓度:1–10 mM;pH:6.0–10.0;温度:0–42°C;Dithiothreitol:0–100 mM;2-mercaptoethanol:0–100 mM;Monovalent cation concentration (Na+, K+, etc.):0–150 mM。
应用实例:
图例一)在20μl体系中,在37℃,30min条件下,1U BenzoNuclease消化不同形式DNA的结果。
泳道M:DNA Ladder 2000;
泳道1:Lambda/HindIII; 泳道2:Lambda/HindIII + 1U BenzoNuclease;
泳道3:ECorI和SalI酶切的Puc19片段; 泳道4:ECorI和SalI酶切的Puc19片段+ 1U BenzoNuclease;
泳道5:Puc19质粒; 泳道6:Puc19质粒+ 1U BenzoNuclease;
泳道7:pBAD质粒; 泳道8:pBAD质粒+ 1U BenzoNuclease;
泳道9:Lambda DNA; 泳道10:Lambda DNA+ 1U BenzoNuclease;
泳道11:800bp 的PCR产物; 泳道12:800bp 的PCR产物+ 1U BenzoNuclease
保存温度:
-20℃
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达90%,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
一个活性单位指在2.625 ml体系中, 37℃,pH8.0条件下,30分钟内使△A260降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)所需要的酶量。
失活条件:
1) 100mM NaOH,70℃处理30分钟可使BenzoNuclease完全失活;
2) 采用EDTA 螯合金属离子会可逆地抑制BenzoNuclease部分活性;
3) 在95℃, 5min会抑制BenzoNuclease部分活性;
4) 在-70℃,>48h,可使1U/ul的BenzoNuclease失活。
保存体系:
20mM Tris-Cl,2mM MgCl2,2mM NaCl,50% GlycerolGlycerolGlycerolGlycerolGlycerolGlycerol Glycerol,pH8.0。
注意事项:
1)不可长期保存在–70°C,超低温使BenzoNuclease失活;
2) BenzoNuclease的活性需要1-2mM Mg2+。而在单价阳离子浓度>50%,磷酸浓度>20mM,硫酸铵浓度>25mM等情况下,BenzoNuclease的活性会降低50%。