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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：BCA Protein Quantification Kit
CAS号 ：点击查看
保质期 ：有效期1年
供应商 ：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
保存条件 ：冰袋运输。试剂盒中的A、B液室温或4℃保存
规格 ：2500T
产品信息
| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
促销价（元） |
| BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） |
20201ES76 |
500T |
288.00 |
274.00 |
| BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） |
20201ES86 |
2500T |
818.00 |
777.00 |
| BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） |
20201ES90 |
5000T |
1518.00 |
/ |
产品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μL）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μL）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。
产品特点
1）灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/mL。
2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3）线性范围广，20-2000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
4）不受大部分样品中的化学物质的影响，详情见附表1。
产品组分
| 编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
储存 |
||
| 20201ES76（500T） |
20201ES86（2500T） |
20201ES90（5000T） |
|||
| 20201-A |
BCA试剂A |
100mL |
500mL |
2×500mL |
4℃ |
| 20201-B |
BCA试剂B |
3mL |
15mL |
2×15mL |
4℃ |
| 20201-C |
蛋白标准品（BSA） |
5×1mL（2mg/mL） |
10×1mL（2mg/mL） |
10×2mL（2mg/mL） |
4℃ |
运输与保存方法
冰袋运输。试剂盒中的A、B液室温或4℃保存；蛋白标准品（BSA）长时间不用，可置于-20℃保存，有效期12个月。
注意事项
1）使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2）低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3）实验操作规范，提高上样量的精确度。
4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6）本产品仅作科研用途！
操作方法
一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。BSA标准品体系配制可参考表1和表2。
表1 BSA标准品体系配制（比色皿检测，线性范围20-2000μg/mL）*
| Vial |
稀释液体积（μL） |
2mg/mL BSA体积（μL） |
BSA终浓度（μg/mL） |
| A |
0 |
100 |
2000 |
| B |
25 |
75 |
1500 |
| C |
50 |
50 |
1000 |
| D |
125 |
75 |
750 |
| E |
150 |
50 |
500 |
| F |
350 |
50 |
250 |
| G |
375 |
25 |
125 |
| H |
395 |
5 |
25 |
| I |
400 |
0 |
0=Blank |
*如用比色皿检测，每管需加100μL标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μL。
表2 BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/mL）*
| Vial |
稀释液体积（μL） |
2mg/mL BSA体积（μL） |
BSA终浓度（μg/mL） |
| A |
0 |
30 |
2000 |
| B |
9 |
21 |
1400 |
| C |
12 |
18 |
1200 |
| D |
15 |
15 |
1000 |
| E |
21 |
9 |
600 |
| F |
24 |
6 |
400 |
| G |
27 |
3 |
200 |
| H |
49 |
1 |
40 |
| I |
30 |
0 |
0=Blank |
2. 配制BCA工作液
1）计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
【注】：比色皿检测时每个样品加2.0mL BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μL BCA工作液。
2）配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。
【注】：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。
二、检测方法
1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1）各取100μL标准品和待测样品加入到反应管中。
2）每管加入2.0mL BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。
【注】：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3）冷却到室温。分光光度计检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。在10分钟内对所有样品读数。
【注】：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1）各取25μL标准品和待测样品加入到微孔板中。
【注】：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μL标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/mL。
2）每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3）冷却到室温，在酶标仪上的540-595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。
【注】：a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
附表：BCA蛋白浓度测定的兼容性
| 名称 |
耐受浓度 |
| Sodium bicarbonate |
100mM |
| Sodium phosphate |
25mM |
| 2-Mercaptoethanol |
0.01% |
| Glycercol （pure） |
10% |
| Glycine-HCl, pH2.8 |
100mM |
| HEPES |
100mM |
| Hydrochloric acid |
100mM |
| Leupeptin |
10mg/L |
| Nickel chloride （in TBS, pH8.0） |
10mM |
| Nonidet P-40 （NP-40） |
5%（w/v） |
| Octyl β -glucoside |
5%（w/v） |
| Potassium thiocyanate |
3.0M |
| SDS |
5% |
| Sodium acetate, pH4.8 |
200mM |
| Sodium azide |
0.20% |
| Sodium hydroxide |
100mM |
| Sucrose |
40% |
| Triton X-100 |
5% |
| Triton X-114, X-305,X-405 |
1% |
| Tween-20, Tween-60, Tween-80 |
5% |
| Zwittergent |
1% |
| ACES, pH7.8 |
25mM |
| 丙|酮 |
10% |
| Acetonitrile |
10% |
| Ammonium sulfate |
1.5mM |
| Aprotinin |
10mg/L |
| Bicine, pH8.4 |
20Mm |
| Bis-Tris, pH6.5 |
33mM |
| Borate, pH8.5 |
50mM |
| Brij-35 |
5% |
| Brij-52 |
1% |
| Brij-56, Brij-58 |
1% |
| BugBuster protein Extraction Reagent （Cat. No. 70584） |
nointerference（undiluted） |
| Calcium chloride （in TBS, pH8.0） |
10mM |
| CelLytic B Reagent |
nointerference（undiluted） |
| Cesium bicarbonate |
100mM |
| CHAPS |
5% |
| Cobalt chloride （in TBS, pH8.0） |
0.8mM |
| CytoBuster Protein Extraction Reagent （Cat. No. 71009） |
nointerference（undiluted） |
| Deoxycholic acid |
5% |
| Dithioerythritol （DTE） |
1mM |
| Dithiothreitol （DTT） |
1mM |
| DMF |
10% |
| DMSO |
10% |
| EDTA |
10mM |
| EPPS, pH8.0 |
100mM |
| Ethanol |
10% |
| Ferric chloride （in TBS, pH8.0） |
10mM |
| Glucose |
10mM |
| Glycerol |
10% |
| Guanidine-HCl |
4M |
| Imidazole, pH7.0 |
50mM |
| MES, PH6.1 |
100mM |
| Methanol |
10% |
| MOPS, pH7.2 |
100mM |
| N-Acetyglucosamine（10mM）in PBS, pH7.2 |
10mM |
| Octyl β-thioglucpyranoside |
5% |
| PIPES, pH6.8 |
100mM |
| PMSF |
1mM |
| PopCulture Reagent （Cat. No. 71092） |
nointerference（undiluted） |
| Reportasol Extraction Buffer （Cat. No. 70909） |
nointerference（undiluted） |
| Sodium chloride |
1M |
| Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4 |
200mM |
| Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 |
1mM |
| Span 20 |
1% |
| TBS （150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0） |
nointerference（undiluted） |
| Thimerosal |
0.01% |
| TLCK |
0.1mg/L |
| TPCK |
0.1mg/L |
| Tricine, pH8.0 |
25mM |
| Triethanolamine, pH7.8 |
25mM |
| Tris |
250mM |
| Tris（hydroxypropyl）phosphine （THP） |
1mM |
| Urea |
3M |
| Zinc chloride （in TBS, pH8.0） |
10mM |
HB200224
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
品牌商实名认证
钻石会员
入驻年限：17年
