E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade

英文名 ：E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade

规格 ：100U

目录号：GMP-M012-01A

 

产品描述:

通过加尾酶在mRNA 3' 末端引入Poly A尾，可增加mRNA的稳定性，增加mRNA翻译效率。使用加尾酶引入的Poly A尾的优势是简便易行，避免在质粒构建时引入过多的连续T碱基造成的质粒不稳定等问题。

E. coli Poly (A) Polymerase 不依赖模板的存在，可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端，即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。Poly (A)结构有助于提高 mRNA 的翻译效率。 

本制品利用大肠杆菌大规模发酵表达，采用药用规格原辅料生产，并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等，符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。

 

质量要求：

 

遵循以下规范生产：

1. ISO 9001:2015, certified facility。

2. 《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。

3. 《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。

4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。

5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。

6.Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。

 

产品用途：

1.  用于 RNA 3´末端标记。

2.  为 RNA 添加 Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化。比如将 miRNA 添加 Poly (A)，为 cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点。

3.  提高 RNA 在真核细胞中的翻译效率。

 

活性定义：

在 37℃条件下，10 min 内将1 nmol AMP 掺入到 RNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位（U）。 

 

保存体系：

20mM Tris-HCl; 300mM NaCl; 1mM DTT; 1mM EDTA; 0.1%TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol, pH7.5。 

 

保存温度：

-20±5 ℃。

 

应用实例：

 

完整mRNA在细胞内表达GFP蛋白，加帽酶与帽类似物对比

 

注意事项：   

1. 热失活条件：65℃，20 min。

2. 该酶只能以 RNA 为底物。

3. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)。

4. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液，也可以进行反应。

5. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性。

6. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响，不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加 A 的长度，该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约 30 个 A 碱基，1 小时可加约 100 个 A 碱基。

7. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应，可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM，或直接对其进行纯化。

 

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For research and manufacturing use only.