2×Fast Pfu Master Mix（Quick Load）

英文名 ：2×Fast Pfu Master Mix（Quick Load）

规格 ：1ml

目录号：E035-02A

 

产品描述：

本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3x10^-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。较普通Pfu酶，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点，能获得更理想的扩增结果，并大幅度缩短扩增反应时间，非常适用于1-20kb长片段的扩增。

 

产品特点：

高保真：具有同Pfu酶相同的保真度，为普通Taq酶的50倍。

灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段（图例一）。

快速高效：Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30秒可延伸1kb以上，可在较短时间内获得高产量的PCR产物（图例二）。

快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

 

产品用途：

用于要求保真度比较高，扩增长度较长的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

 

使用建议：

Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，除使用NovoRec^® PCR一步定向克隆试剂盒（Cat.   No: NR005）外，其它PCR产物的克隆方案有：

1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。

3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

 

保存温度：

-20℃

 

应用实例：

图例一）50μl扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，扩增1.2kb的特定基因片段

泳道1：50ng；泳道2：5ng；

泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；

泳道M：DNA Ladder 2000。

 

 

图例二）50μl扩增体系中，λDNA为模板，扩增1kb~20kb片段。

泳道M：λ/Hind III   DNAMarker；

泳道1：1kb；泳道2：2kb；

泳道3：4kb；泳道4：6kb；

泳道5：8kb；泳道6：10kb；

泳道7：12kb；泳道8：20kb。

 

 

参考文献：

TJP2 hepatobiliary disorders: Novel variants and clinical diversity[J]. Jing Zhang et al. Human Mutation. 2019.

Characterization of the ABA Receptor VlPYL1 That Regulates Anthocyanin Accumulation in Grape Berry Skin[J]. Zhen Gao et al. Front Plant Sci. 2018.

Grapevine ABA receptor VvPYL1 regulates root hair development in Transgenic Arabidopsis[J]. Hui Li et al. PLANT PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY. 2020.

Expression and localization patterns of a small heat shock protein that interacts with the helicase domain of Cucumber green mottle mosaic virus[J]. Shanshan Liu et al. Phytopathology. 2019.

Structural Characterization and Evolutionary Analysis of Enoyl-CoA Hydratase in Mycobacterium tuberculosis[J]. Cuiping Wang et al. Journal of Biobased Materials and Bioenergy. 2019.

Bacterial Diversity of Grapevine Rhizosphere Soil Revealed by High-Throughput Sequence Analysis from Different Vineyards in China[J]. Ping Zhao et al. Journal of Biobased Materials and Bioenergy. 2018.

Reversibly immortalized hepatic progenitor cell line containing double suicide genes[J]. Shu‑Yu Fang et al. International Journal of Molecular Medicine. 2018.

 

        For research use only.