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英文名 ：Protein G

CAS号 ：/

保质期 ：24个月

供应商 ：李记生物

保存条件 ：4℃

规格 ：1 mL

Protein G琼脂糖凝胶

产品描述
Protein G琼脂糖通常用于从血清、细胞培养上清或腹水中分离抗体，以及从细胞或组织提取物中分离抗原进行免疫沉淀和免疫共沉淀。
蛋白G琼脂糖偶联高质量的重组蛋白G，它可以结合抗体的IgG结合域,这些结构域可以与许多不同物种的抗体结合，包括小鼠、人、兔、猪、狗和猫。
订购信息

产品名称	货号	规格	价格
Protein G琼脂糖凝胶	AP64L223	1 mL	400

运输与保存
常温运输。4℃保存，有效期24个月。
技术参数

介质	4%高度交联的琼脂糖微球
大小	30-100um
浓度	25%
结合力	≥ 6 mg human IgG/mL of beads
适用范围	IP，CoIP, ChIP

使用方法
悬浮细胞样品
1.4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。
2.用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。
3.用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50mg 细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。
4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80 ℃长期保存）。
血清样品
一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20 ℃长期保存）。
免疫复合物的制备
【注】：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体-抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。
以下实验方案针对2-10μg 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1.在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2-10μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500-1500μg。
2.用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至300-500μL。
3.在室温下孵育1-2 h，或4 ℃过夜，以形成免疫复合物。
免疫沉淀
【注】：为保证微球均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中微球。
1.将25µLProtein G琼脂糖加入1.5 mL 离心管中。
2.向离心管中加入500 µL 预冷PBS，轻柔混匀。
3.然后4℃、1000g离心5min,去除上清。
4.向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1min。4℃、1000g离心5min,去除上清。
5.将抗原样品/抗体混合物加入装有Protein G琼脂糖的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h，或4℃过夜。
6.4℃、1000g离心5min，除去未结合的样品，保存以备分析。
7.向离心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀。4℃、1000g离心5min收集琼脂糖，弃上清。再重复洗两次。
8.向离心管中加入80-100 µL的SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。离心后，保留含有目的抗原的上清。
注意事项
1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致微球聚集而降低结合能力。
3.IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物的相关产品，参照相关产品推荐。
4.琼脂糖使用前应充分振荡均匀。琼脂糖应保存在储存溶液中，防止干燥。

附录：蛋白G与不同种类的Ig，s及其亚类的结合强度

Species	Antibody Subtype	Protein A	Species	Antibody Subtype	Protein A	Species	Antibody Subtype	Protein A
Human	Total IgG	+++++	Mouse	Total IgG	+++	Cow	Total IgG	+++++
	IgG1, IgG2	+++++		IgM	-		IgG1,IgG2	+++++
	IgG3	+++++		IgG1	+++++	Goat	Total IgG	+++++
	IgG4	+++++		IgG2a ,IgG2b	+++		IgG1,IgG2	+++++
	IgM	-		IgG3	+++	Sheep	Total IgG	+++
	IgD	-	Rat	Total IgG	+++		IgG1, IgG2	+++
	IgA	-		IgG1	+++	Horse	Total IgG	+++
	IgA1, IgA2	+		IgG2a	++++++		IgG(ab),IgG(c)	+
	IgE	+++		IgG2b	+++		IgG(T)	+++++
	Fab	+++		IgG2c	+++++	Monkey	Total IgG	+++++
	ScFv	+	Pig	Total IgG	+++	Chicken	Total IgG	-
Rabbit	Total IgG	+++++	Donkey	Total IgG	+++++	Notes:	+ weak binding	+++ medium binding
Guinea Pig	Total IgG	+++	Cat	Total IgG	+++		+++++ strong binding	- no binding
Hamster	Total IgG	+++	Dog	Total IgG	+++

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公司简介
李记生物-专注高效转染试剂
感谢您对于李记生物一直以来的关注和支持！希望在未来，李记能一直伴您前行！
上海李记生物成立于2015年，坐落于大美浦东。是集研发、生产、销售为一体的国产生物试剂公司，目前拥有多名复旦、交大、同济博士的研发团队，和一支年轻、专业敢拼的销售团队，以及在全国40余座城市铺设多名授权代理商体系。
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李记生物-WB技术服务
我们于2021年11月正式开始对外承接western blot服务，我们有超过10年的WB实验经验的超专业团队。用户只需提供样本和一抗（李记可帮忙代购），我们将为您提供完整的实验步骤和结果，提供专业的数据分析，提供电子版扫膜结果。