嘌呤霉素 (Puromycin Dihydrochloride)

库存 ：量大从优，欢迎询价

英文名 ：Puromycin Dihydrochloride

CAS号 ：/

保质期 ：24个月

供应商 ：李记生物

保存条件 ：-20℃

规格 ：25mg

嘌呤霉素 (Puromycin Dihydrochloride)

产品描述
Puromycin是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基核苷类抗生素，中文名为嘌呤霉素，常用于筛选通过质粒转染/转化、病毒感染等方法能表达pac基因(puror)的真核或原核多克隆或单克隆细胞。Puromycin不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。本产品的10mg/ml包装经过滤除菌，可以直接用于细胞培养。
Puromycin的特点是快速作用于细胞，一般2 d内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞。
在革兰氏阳性菌、动物或昆虫细胞中，嘌呤霉素通过抑制蛋白质合成而抑制或杀死细胞。其作用机制为嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3'末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素与A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
Pac基因表达嘌呤霉素N-乙酰转移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase)，该基因是在Streptomyces alboniger中发现的。如果表达基因，就会对嘌呤霉素产生抗性，这一特性目前普遍应用于筛选表达pac基因的哺乳动物稳定细胞株等。例如，很多商业化的慢病毒载体都携带pac基因(一般在质粒图谱上标记为puror)，从而利用嘌呤霉素筛选特定基因的稳定表达细胞株。嘌呤霉素也可以用来筛选表达pac基因的大肠杆菌菌株、酵母菌株等。
订购信息

产品名称	货号	规格
嘌呤霉素 (Puromycin Dihydrochloride)	AB11L241	25 mg

运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存，有效期24个月。
技术参数
1.CAS：58-58-2
2.分子式：C22H29N7O5•2HCl
3.分子量：544.43
4.纯度：>98%
5.结构式：

使用方法
1.推荐工作浓度：
推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1-10μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定

表1. 部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度表

细胞名称	细胞类型	嘌呤霉素浓度
A549	Lung cancer	1-2μg/ml
B16	Mouse melanocytes	1-2μg/ml
ES cell	Human embryonic stem cells	0.5-5μg/ml
H1299	Non-small cell lung carcinoma	1-3μg/ml
HEK293	Human embryonic kidney	0.5-3μg/ml
HeLa	Human cervical cancer	1-2μg/ml
HepG2	Human hepatocellular carcinoma	0.5-2μg/ml
HT1080	Human fibrosarcoma	0.5-2μg/ml
MCF-7	Human breast cancer	0.5-2μg/ml
MDA-MB-231	Human breast cancer	0.5-5μg/ml
MEF	Mouse fibroblasts	1-5μg/ml

2. 嘌呤霉素剂量反应曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒感染为例）
嘌呤霉素的有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的shRNA或感染病毒的细胞株，确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞，一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接种细胞，接种够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。细胞培养箱内培养过夜。
（2）第二天：在培养过夜后的细胞中更换新鲜配制的筛选培养基，该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等)，更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。
（3）第三天后：由于嘌呤霉素可以快速作用于细胞，一般2 d内可以杀死99%的未表达pac基因的细胞，所以在加嘌呤霉素后的1-2 d就可以进行观察细胞存活率，从而确定有效杀死正常细胞的药物最低浓度。如果细胞耐药性比较强，需要每日观察，一般4-10 d内即可确定嘌呤霉素的最低浓度。
3. 哺乳动物稳定表达细胞株的筛选
转染含有pac基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后，即可筛选稳定表达株。
（1）细胞转染或感染48 h后，将细胞置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养，此为处理组。
【注】：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降，所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48 h后，如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞，培养过夜后即可进行嘌呤霉素筛选。
（2）每隔2-3 d，更换含有嘌呤霉素的培养基。
（3）筛选7 d后，对照组正常细胞应该100%死亡，处理组中存活的细胞为表达pac基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。
【注】：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要24 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在2-10 d。
（4）待细胞可以稳定生长后，嘌呤霉素的浓度可以减半用于后续的培养。在得到稳定表达细胞株后，一般建议嘌呤霉素也须持续加入，并2-3 d更换含有嘌呤霉素的新鲜培养液。
注意事项
1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2.用于细胞实验，溶解后，须用一次性针头滤器过滤除菌。
3.抗生素不稳定，请在有效期内尽快使用。
4.以上数据均来自公开文献，李记生物暂未本产品进行独立验证，仅供参考。
相关产品推荐
博莱霉素 (Zeocin)货号：AB11L251）
其他产品简介

快速细胞冻存液（无血清、无蛋白）（货号：AC05L033）
上海李记生物快速细胞冻存液（无血清、无蛋白）可适应于绝大部分肿瘤细胞和常规细胞，大部分干细胞（李记已测试细胞种类请关注官网），冻存细胞可在 -80℃ 长期保存（＞6年）。不含动物源性蛋白，不含血清成分，可有效减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。该冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分，提高细胞存活率和活力，亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。


公司简介
李记生物-专注高效转染试剂
感谢您对于李记生物一直以来的关注和支持！希望在未来，李记能一直伴您前行！
上海李记生物成立于2015年，坐落于大美浦东。是集研发、生产、销售为一体的国产生物试剂公司，目前拥有多名复旦、交大、同济博士的研发团队，和一支年轻、专业敢拼的销售团队，以及在全国40余座城市铺设多名授权代理商体系。
李记生物试剂，铸造百年经典！我们将不断致力于生物实验试剂的创新研发、高质生产、贴心服务，为科研向前略尽绵薄之力！
李记生物-WB技术服务
我们于2021年11月正式开始对外承接western blot服务，我们有超过10年的WB实验经验的超专业团队。用户只需提供样本和一抗（李记可帮忙代购），我们将为您提供完整的实验步骤和结果，提供专业的数据分析，提供电子版扫膜结果。