产品详情
文献和实验
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库存 ：大量
保存条件 ：-20℃保存
保质期 ：一年
供应商 ：Bestbio-贝博
规格 ：50 assays/100 assays
产品简介：
本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织制备核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品组成：
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产品组成
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310001
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310002
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规格
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50 assays
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100 assays
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Buffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent)
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10ml
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20ml
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Buffer B (Nuclear Extraction Reagent)
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10ml
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20ml
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蛋白酶抑制剂混合物
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250ul
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500ul
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使用方法：
A．细胞蛋白提取
1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
B．组织蛋白提取
1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项：
1. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
储存条件：
-20℃保存。
有效期：
一年。
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