T4连接酶-T4 DNA Ligase (30U/μL）

库存 ：50

英文名 ：AZENTA

供应商 ：AZENTA安升达

保存条件 ：-20℃保存

规格 ：50ul/100ul/500ul

产品内容：

产品组成	GWC300S	GWC300M	GWC300L
	500 Weiss Unit	1000 Weiss Unit	2500 Weiss Unit
WizsmartTM T4 DNA Ligase	100 μL	200 μL	500 μL
2×T4 Quick Buffer	2mL	3mL	8mL

货号：GWC300
浓度：5 Weiss Unit
有效期：24个月
保存条件：-20℃

产品简介
Wizsmart^TM T4 DNA Ligase催化双螺旋DNA或RNA的3′端羟基和5′端磷酸基形成磷酸二酯键。该酶修复双链DNA、RNA和DNA/RNA杂合体中的单链缺口。连接粘性或平末端DNA片段，Wizsmart^TM T4 DNA Ligase需要ATP作为辅助因子。

应用
ü  用于限制性内切酶酶切的DNA片段的克隆；
ü  PCR产物的克隆；
ü  连接双链寡核苷酸接头到DNA上；
ü  定点突变；
ü  扩增AFLP；
ü  连接酶介导的RNA检测；
ü  双螺旋DNA、RNA或DNA:RNA杂合体的缺口修复；
ü  线性化的DNA自连；

活性单位定义：
1个黏性末端连接单位（CEU）：在16℃、30min内50%连接HindⅢ酶切的lambda DNA产物所需要的酶量。
CEU和Weiss Unit 存在下列转化关系：1 Weiss Unit = 200 CEU

储存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) glycerol

2×T4 Quick Buffer
80 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl₂, 20 mM DTT, 1 mM ATP (pH 7.8 at 25℃).

抑制或失活条件：
ü  当NaCl或KCl的浓度大于200mM时强烈抑制Wizsmart^TM T4 DNA Ligase的活性。
ü  65℃10min或70℃ 5min可以使Wizsmart^TM T4 DNA Ligase失活。


DNA与载体连接
1. 连接反应体系

Linear DNA	20-100 ng
Insert DNA	1:1-5:1（插入片段：载体，molar ratio）
2×T4 Quick Buffer	10 μL
WizsmartTM T4 DNA Ligase	1 μL (5 Weiss Unit)
灭菌水	补水至20 μL

2. 22℃孵育30min
3. 50μL化转感受态用5μL连接产物；如果连接产物用于电转，需要将连接产物用试剂盒或酚/氯仿/异丙醇沉淀的方法进行纯化，取1-2μL到50μL电转感受态细胞。


备注：
1. 如果连接产物用于电转，连接产物需要用试剂盒或酚/氯仿/异丙醇沉淀的方法进行纯化；
2. 以下方法可以提高电转效率：
ü  纯化DNA：用商业化试剂盒或酚/氯仿/异丙醇沉淀的方法进行纯化
ü  延长连接反应时间
ü  20μL反应体系中如果使用超过2 Weiss Unit的Wizsmart^TM T4 DNA Ligase，电转前需要纯化DNA