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库存 :999
英文名 :见包装
CAS号 :见包装
保质期 :见包装
供应商 :Abiowell
保存条件 :RT
规格 :2×100ml/2×500ml
苏木素伊红(HE)染色液
产品简介:
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色,是病理学和组织学最常用的一种染色方法。应用极其广泛。苏木素是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶,是一种碱性染色剂,它在被氧化后生成苏木素,同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用,能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中,常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分,而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中,细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色,二者形成鲜明的对比,易于观察分析。
苏木素伊红染色液中,苏木素染色液采用自主研发的配方,由进口的高纯度苏木素、氧化剂等组成,不含HgO、甲醇等有害物质,对细胞核染色效果好。其特点是不易产生沉淀和金属;应用范围广,可以用于人、动物、畜牧、水产等领域,可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等;苏木素染色液可以重复使用。
染色原理:
1、 细胞核染色的原理:
苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
2、 细胞浆染色的原理:
伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。
3、 分化作用:
染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后,必须用1%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
4、 返蓝作用:
分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来不浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。
自备材料:
1、 盐酸乙醇分化液
2、 蓝化液,如稀NH₃(aq)、碳酸锂溶液等
3、 系列乙醇
4、 4%POM
操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、 切片脱蜡至水
①二甲苯作用2次,每次5~10min。
②(可选)无水乙醇作用2次,每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min。
④90%的乙醇3~5min。
⑤80%的乙醇3~5min。
⑥自来水或蒸馏水冲洗1~3min。
2、 染色
①苏木素染色液染色5~8min。
②自来水或蒸馏水冲洗5~10s。
③(可选)盐酸乙醇分化2~5s。
④自来水冲洗20~30s。
⑤蓝化液返蓝20~40s。
⑥自来水冲洗30~60s。
⑦伊红染色液染色3~5min。
⑧自来水冲洗1~5s。
3、 脱水、透明、封固
①80%乙醇10~20s。
②90%乙醇10~20s。
③95%乙醇作用2次,每次1~2min。
④无水乙醇作用2次,每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。
⑥中性树脂封片。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色;角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。
(二)冰冻切片染色
1、 Ether-乙醇混合固定液5~10s
2、 自来水冲洗2~5s
3、 苏木素染色液滴染1~2min(可加热至50℃)
4、 自来水冲洗2~5s
5、 (可选)盐酸乙醇分化2~5s
6、 自来水冲洗2~5s
7、 蓝化液返蓝2~5s
8、 自来水冲洗5~10s
9、 伊红染色液染色2~5s
10、 自来水冲洗1~2s
11、 80%的乙醇1~2s
12、 95%的乙醇1~2s
13、 无水乙醇2~5s
14、 苯酚二甲苯(1:3)2~5s
15、 二甲苯透明3次,每次2~5s
16、 中性树脂封片
备选方案:
1、 无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗2~3min。
2、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
(三)细胞染色
1、 4%POM固定10~20min。
2、 自来水冲洗2次,每次2min。
3、 蒸馏水冲洗2次,每次2min。
4、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,作用时间应相应缩短。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。
2、 盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。
3、 Ether-乙醇混合固定液是由Ether和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。
4、 冷冻切片染色时间尽量要短。
5、 蓝化液常使用0.2~1%NH₃(aq)或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸埋溶液。
名称 | AWI0020a (2×100ml) | AWI0020b (2×500ml) | storage |
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试剂(A):苏木素染色液 | 100ml | 500ml | RT |
试剂(B):伊红染色液 | 100ml | 500ml | RT |
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