Lumi纯质粒旋转miniprep试剂盒价格_品牌:齐源-丁香通官网

库存：大量

英文名：LumiPure Plasmid spin miniprep Kit

CAS号：/

保质期：保质期12个月

供应商：齐源生物

保存条件：在室温下储存

规格：50 次

Lumi纯质粒旋转miniprep试剂盒详细如下：
LumiPure Plasmid spin miniprep Kit 专为从大肠杆菌中快速有效地纯化质粒 DNA 而设计使用旋转柱进行培养。首先，将细胞沉淀重悬，然后使用 Lysis Solution 进行碱性细胞裂解。裂解液与中和缓冲液混合，使 DNA 在高离液剂浓度下选择性地结合到柱中的膜上。通过离心沉淀变性蛋白质、基因组 DNA 和 SDS，并将含有质粒 DNA 的上清液加载到离心柱上。在接下来的步骤中，对结合的 DNA 进行一系列洗涤。洗涤液的特殊配方可以完全去除柱膜上的杂质。最后，用洗脱缓冲液或必要时用去离子水洗脱基因组 DNA。

套件规格：

样品：携带质粒 DNA 的大肠杆菌细胞
操作时间：15分钟
柱结合能力：30 µg DNA
DNA 典型产量：高达 30 µg，具体取决于质粒拷贝数和处理后的培养体积
DNA 纯度：OD ₂₆₀ /OD ₂₈₀ >1.8

纯化后的 DNA 适用于任何后续应用，如 PCR、限制性内切酶消化、连接转化、体外转录、制备 Sanger 测序和 NGS 样品等。

用户提供的设备和试剂：

带有转子的微型离心机，适用于 1.5 mL 试管，能够离心 >10,000 RPM (6,700 × g)；
96% 乙醇；
1.5 mL 微量离心管（2 管用于从 1 个生物样品中纯化 DNA）；
（可选）带转子的台式离心机，用于 15 mL 管，能够离心 >4,500 × g，用于过夜细菌培养物的离心（或者，可以使用带转子的微量离心机，用于 1.5 mL 管）。

在开始之前

将RNase A小瓶的内容物转移到重悬溶液小瓶中并彻底混合。在标签上标记已添加RNase A。
用 96% 乙醇将洗涤液 B的浓缩物稀释 5 倍（将 4 体积的 96% 乙醇添加到瓶子上指定的 1 体积浓缩物中）。在标签上标记已添加乙醇。
如果在裂解液、中和缓冲液、洗涤液 A 中形成任何沉淀，则将溶液在不高于 50 °C 的温度下孵育，直至沉淀完全溶解。使用前让溶液冷却至 25 °С。

质粒 DNA 的纯化

所有离心步骤均在室温下进行，转速为 10,000–13,000 RPM (6,700–11,000 xg)（除非另有说明）。
处理 OD ₆₀₀不超过 30 AU 的细菌培养物（例如，OD ₆₀₀ = 2 AU 的 15 mL 培养物）。如果要处理的细胞量较大，则应按比例增加重悬液、裂解液、中和缓冲液的体积，并分几个阶段将上清液上样到柱中。

将 2.5–7 mL 的 大肠杆菌过夜培养物（对于低拷贝数质粒，10–15 mL）离心 5 分钟，5,000 RPM (4,500 × g) 或 1 分钟，13,000 RPM (10,000 x g)。去除上清液和所有剩余的培养基。
在 250 μL 的 重悬溶液中重悬细胞沉淀。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
加入 250 μL 裂解液，颠倒离心管 4-6 次轻轻混匀。检查混浊溶液是否变得粘稠和清澈，并立即进行下一步。

！如果要处理 10–15 mL 的细菌培养物，则通过倒置管子彻底混合，直到溶液变得粘稠和清澈。在某些情况下，可能需要更多的反转。

！不要涡旋样品。这会导致染色体 DNA 的剪切。
向样品中加入 350 μL 中 和缓冲液，颠倒离心管 4-6 次轻轻混匀。因此，样品中应出现薄片形式的沉淀。

！如果要处理 10–15 mL 的细菌培养物，在管内容物混合后，摇动管子一小段时间（几秒钟）。
将样品离心 5 分钟。
将旋转柱放入收集管中。小心地将上清液转移到柱子上。将色谱柱离心 30 秒。丢弃流出液并将色谱柱放回同一收集管中。

！（可选）要去除内毒素或微量核酸酶活性（使用 EndA+ 菌株时），将 500 µL 清洗液 A 添加到色谱柱中（此步骤可导致 DNA 产量最多降低 20%）。将色谱柱离心 30 秒。丢弃流出液并将色谱柱放回同一收集管中。
加入 500 µL 洗涤液 B，将色谱柱离心 30 秒。丢弃流出液并将色谱柱放回同一收集管中。
加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃有流通的收集管。
将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。在离心柱膜的中心加入 50–100 µL 的 洗脱缓冲液。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 2 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。

！如需增加 DNA 浓度，请使用少量的洗脱缓冲液。不推荐使用体积小于 50 µL 的洗脱液，因为这不足以完全润湿膜，导致 DNA 回收率低。为提高 DNA 产量，请使用更高体积的洗脱缓冲液 (100 µL)。

！如有必要，可以用去离子水洗脱 DNA。