来自 AnySample 试剂盒的 LumiPure 基因组 DNA

价格： ￥2400

品牌：齐源

货号：21573

产品详情

套件规格：

样本：植物和动物组织和器官、全血、口腔拭子、白细胞、培养的哺乳动物细胞和革兰氏阴性菌
操作时间：30分钟
柱结合能力：20 µg DNA
DNA 典型产量：植物和动物组织 – 3–20 µg（取决于样品），全血 (100 µL) – 1–3 µg，白细胞（从 1 mL 全血中分离）– 4–5 µg，口腔拭子– 0.5–2 µg，培养细胞 (1 × 10 ⁶ ) – 3–6 µg，革兰氏阴性菌 (1 × 10 ⁸ ) – 5–10 µg
DNA 质量：30–50 kb 大小，OD 260/280 1.7–1.8

分离的 DNA 适用于 PCR、限制性内切酶消化、Southern 印迹、制备 Sanger 测序和 NGS 的样品等。
该试剂盒允许使用离心柱从各种生物样品中快速（约 30 分钟）高效纯化基因组 DNA：植物和动物组织和器官、全血、口腔拭子、白细胞、培养的哺乳动物细胞和革兰氏阴性细菌。分离的 DNA 稳定，适用于 PCR、限制性内切酶消化、Southern 印迹、Sanger 测序和 NGS 制备样品等。
基因组 DNA 的典型产量（30–50 kb 大小，OD ₂₆₀ /OD ₂₈₀ 1.7–1.8）：

革兰氏阴性菌 (1×10 ⁸ )：5–10 µg
植物叶子，针叶（50 毫克）：3–5 µg
鼠尾：7–14 µg
小鼠肾脏：10–20 µg
小鼠心脏：7–14 µg
小鼠肝脏：10–15 µg
白细胞（从 1 mL 全血中分离）：4–5 µg
全血 (100 µL)：1–3 µg
口腔拭子：0.5–2 µg
培养的哺乳动物细胞 (1×10 ⁶ )：3–6 µg
用户提供的设备和试剂：
加热块（或者，可以使用水浴）；
带有转子的微型离心机，适用于 1.5 mL 试管，能够离心 >10,000 RPM (6700 × g)；
96% 乙醇；
1.5 mL 微量离心管（2 管用于从 1 个生物样品中纯化 DNA）；
在开始之前
用 96% 乙醇将洗涤液 B 的浓缩物稀释 5 倍（将 4 体积的 96% 乙醇添加到瓶子上指定的 1 体积浓缩物中）。在标签上标记已添加乙醇。
将 600 µL 蛋白酶 K 稀释缓冲液加入含有冻干蛋白酶 К的小瓶中。彻底混合并短暂离心。

！制备后将蛋白酶 K 溶液储存在 -20 °C。
如果在吸附溶液或 洗涤溶液 A中形成任何沉淀，则将溶液在不高于 50 °C 的温度下孵育，直到沉淀完全溶解。
所有离心步骤均在室温下以 10,000–13,000 RPM (6700–11,000 x g) 进行。

从植物和动物组织和器官中纯化 DNA
使用 20–40 mg 动物组织或 50–100 mg 植物组织作为 DNA 纯化样品。
1. (А) 用塑料杵（随试剂盒提供）进行样品均质化：
  1. 将一块组织放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。
  2. 添加到示例中
    - 200 µL 裂解液 AS ,
    - 70-100 毫克刚玉。
  3. 用试管和杵彻底研磨样品。
  4. 将 300 μL 的 裂解溶液 AS 添加到样品中并混合。
1. (B) 用研钵和杵（用户自备）进行样品均质化：
  1. 将一块组织放入研钵中。
  2. 添加到示例中
    - 100 µL 去离子水，
    - 200 µL 裂解液 AS ,
    - 300–500 毫克 刚玉。
  3. 用研钵和杵彻底研磨样品。
  4. 将 300 μL 的 裂解溶液 AS 添加到样品中并混合。
  5. 将混合物转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
1. (C) 对于未经均质化的样品（鼠尾或其他样品）裂解：
  1. 将一块组织放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。
  2. 将 500 µL裂解液 AS添加到样品中。
2. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
3. 添加到示例中
  - 5 µL RNase A ,
  - 10 µL 蛋白酶 К ,
  搅拌均匀。
4. 对于 (A) 和 (B)：在 55°C 下孵育管 20 分钟，偶尔涡旋（1-2 次），
  
  对于 (C)：在 55 °C 下孵育管直至裂解完成（1-4 小时，偶尔涡旋震荡小组织块，过夜震荡小鼠尾巴或较大的组织块。骨骼、毛发、软骨等一些成分没有以这种方式裂解的可能存在于裂解物中）。
5. 向样品中加入 350 μL 的 吸附溶液。通过涡旋充分混合以获得均匀的溶液。
6. 将样品离心 10 分钟。
7. 将旋转柱放入收集管中。将上清液添加到色谱柱中（每次加载最多 800 μL）。将色谱柱离心 60 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
8. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
9. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
10. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–100 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。
从口腔拭子中纯化 DNA
1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 将 500 μL 的 Lysis Solution AS添加到 1.5 mL 微量离心管中，并在Lysis Solution AS中彻底冲洗口腔拭子样本。对管侧使用滚动动作，然后将棉签挤压到管侧，以尽可能多地去除液体。
3. 将 10 µL 蛋白酶 К 添加到样品中并混合。
4. 在 55°C 下孵育管 10 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
5. 向样品中加入 300 μL 的 吸附溶液。通过涡旋充分混合以获得均匀的溶液。
6. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
7. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
8. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
9. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–100 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。
从全血中纯化 DNA
该试剂盒设计用于处理 100 μL 全血（含有肝素、EDTA、柠檬酸盐等抗凝剂的新鲜或冷冻全血）。通过倒置彻底混合血液管，使内容物变得均匀。将 100 μL 全血移入干净的 1.5 mL 管中。
1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 将 400 μL 的 裂解溶液 AS添加到含有 100 μL 全血的 1.5 mL 微量离心管中。
3. 将 10 µL 蛋白酶 К添加到样品中并混合。
4. 在 55°C 下孵育管 10 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
5. 向样品中加入 300 μL 的 吸附溶液。通过涡旋充分混合以获得均匀的溶液。
6. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
7. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
8. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
9. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–100 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。
从白细胞中纯化 DNA
与从全血中纯化 DNA 相比，预先分离白细胞提供了更高的 DNA 产量。推荐用于白细胞分离的全血样品体积为 1 mL。
1. 准备 9 mL 的 1x 红细胞裂解缓冲液，用于从 1 mL 的全血中分离白细胞：在 15 mL 管中混合 900 μL 的 10x红细胞裂解缓冲液和 8.1 mL 的去离子水。
2. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
3. 在 15 mL 管中混合 1 mL 的全血和 9 mL 的 1x 红细胞裂解缓冲液。充分混合并在室温下将试管孵育 5 分钟。
4. 以 300 xg 离心样品 5 分钟。去除上清液。沉淀包含分离的白细胞。
5. 在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
6. 添加到示例中
  - 400 µL 裂解液 AS ,
  - 5 µL RNase A ,
  - 10 µL 蛋白酶 К。
  搅拌均匀。
7. 在 55°C 下孵育管 10 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
8. 向样品中加入 300 μL 的 吸附溶液。通过涡旋充分混合以获得均匀的溶液。
9. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
10. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
11. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
12. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–100 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。
从培养的哺乳动物细胞和革兰氏阴性菌中纯化 DNA
使用不超过 5×10 ⁶的培养哺乳动物细胞和 10 ⁹ 的革兰氏阴性细菌细胞进行 DNA 纯化。
贴壁哺乳动物细胞培养：去除生长培养基，通过胰蛋白酶消化或选择的方法收获细胞。以 300 xg 离心细胞 5 分钟。去除上清液。在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
悬浮哺乳动物细胞培养：以 300 x g 离心 5 分钟收获细胞。去除上清液。在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
细菌培养：通过在 3000–5000 xg 下离心 5 分钟，收获在固体或液体培养基中生长的细菌。去除上清液。在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 添加到示例中
  - 400 µL 裂解液 AS ,
  - 5 µL RNase A ,
  - 10 µL 蛋白酶 К。
  搅拌均匀。
3. 在 55°C 下孵育管 10 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
4. 向样品中加入 300 μL 的 吸附溶液。通过涡旋充分混合以获得均匀的溶液。
5. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
6. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
7. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
8. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–100 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 1 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。
笔记
要增加 DNA 浓度，请使用较小体积的 洗脱缓冲液。不推荐使用体积小于 50 µL 的洗脱液，因为这不足以完全润湿膜，导致 DNA 回收率低。为提高 DNA 产量，请使用更高体积的 洗脱缓冲液(100 µL)。
预热至 55 °С 的洗脱缓冲液可促进结合 DNA 的最佳回收。使用平衡至室温的洗脱缓冲液进行洗脱也是可以接受的，但 DNA 回收率显着降低（高达 30–50%）。
为了最大限度地提高 DNA 回收率，建议进行两步洗脱。
如有必要，可以用去离子水洗脱 DNA。
测量 DNA 浓度时，仅使用试剂盒随附的TE 缓冲液 pH 8.5 或洗脱缓冲液稀释样品。否则，可能会错误地估计DNA 浓度和纯度（分别为 OD ₂₆₀和 OD ₂₆₀ /OD _{280 ）。}
纯化 DNA 的储存：长期储存 -20 °C，短期储存 +4 °С。