文献支持PCR Master Mix 高保真酶预混液(含染料)

2×Hieff Canace^® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace^® Plus High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace^® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中含有电泳指示染料，PCR产物可直接进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

 

产品应用

 

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

 

推荐PCR反应体系

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Primer反向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)	25 μL	1×

      【注】：1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

    2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。

    3）Mg2+、dNTPs终浓度：在1×预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。

    4）不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10 pg-20 ng
cDNA	1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10）

 

PCR扩增程序

有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

             

两步法程序（优先推荐）：					三步法程序（常规程序）：
循环步骤	温度	时间	循环数		循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98°C	3 min	1		预变性a	98°C	3 min	1
变性	98°C	10 sec	30-35		变性	98°C	10 sec	30-35
延伸	68°C	30 sec/kb			退火b	60°C	20 sec
终延伸	72°C	5 min	1		延伸c	72°C	30 sec/kb
					终延伸	72°C	5 min	1

     

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:					*不同扩增程序下的特点：
步骤	温度	时间	循环数		程序类型	两步法	三步法	梯度退火
预变性	98°C	3 min	1		速度	最快	中等	慢
变性	98°C	10 sec	15，每个循环降低1℃		特异性	高	中等	高
梯度退火	70-55°C	20 sec			PCR产量	中等	最高	中等
延伸	72°C	30 sec/kb			检出率	高	中等	高
变性	98°C	10 sec	20
正常退火	55°C	20 sec
延伸	72°C	30 sec/kb
终延伸	72°C	5 min	1

【注】：

a. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。 
b. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

     c. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。 

 

相关产品
 

产品名称	货号	规格
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10153ES60/76/80	100 U/500 U/1000 U
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10148ES60/76/80	100 U/500 U/1000 U
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液	10149ES03/08	1 mL/5×1 mL
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT	10909ES20	20 T
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点）	10910ES20	20 T
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒HOT	10911ES20	20 T
Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆试剂盒HOT	10912ES10	10 T
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒HOT	11003ES10	10 T
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒HOT	11004ES10	10 T

 

HB211222

保存条件：-20℃保存

供应商：翌圣生物科技(上海)股份有限公司

保质期：有效期1年

CAS号：无

产地：上海

货号：10154ES

英文名：2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)

品牌：翌圣生物（Yeasen）

库存：大量现货

规格：100 μL (CAT#10154ES01)/1mL (CAT#10154ES03)/5×1mL (CAT#10154ES08)