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库存 :咨询
供应商 :北京索莱宝科技有限公司
规格 :500Rxns
QuickCut快速限制性内切酶XhoI快速内切酶XhoI
货号:Q2190
规格:500T
保存:-20℃保存,有效期2年。
5'...C T C G A G...3'
3'...G A G C T C...5'
同裂酶: PaeR7I,TliI,BssHI,Sfr274I,SlaI,StrI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。
产品组成:
组分 | 500T | Storage |
快速内切酶XhoI | 500μl | -20℃ |
10× Reaction Buffer | 1 ml×2 | -20℃ |
10× Reaction Color Buffer | 1 ml×2 | -20℃ |
快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 Reaction 酶切 Buffer 中具有 100% 活性,支持一管化反应,提升“酶切—修饰—连接”的体验。
建议反应条件:1× Reaction 缓冲液;37℃温育;参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件:80℃ 温育 20 min。
产品应用:
- DNA 快速酶切流程
质粒 DNA | PCR 产物 | 基因组 DNA | |
ddH2O | 15μl | 16μl | 30μl |
10×Reaction Buffer 或10×Reaction Color Buffer | 2μl | 3 μl | 5μl |
底物 DNA | 2 μl (up to 1 μg) | 10 μl (~0.2 μg) | 10 μl (5 μg) |
快速内切酶 XhoI | 1μl | 1μl | 5μl |
Total | 20μl | 30μl | 50μl |
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系 | |||||
DNA | 1 μg | 2 μg | 3 μg | 4 μg | 5 μg |
快速内切酶 XhoI | 1μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
10× Reaction Buffer 或 10× Reaction Color Buffer | 2μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
Total | 20μl | 20μl | 30μl | 40μl | 50μl |
质量控制
质控项目 | 质控标准 |
功能活性检测 | 最适反应温度下,在 20 μl 反应体系中,1 μl 快速内切酶 XhoI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA 。 |
星号活性测试 | 最适反应温度下,将 1 μl 快速内切酶 XhoI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。 |
酶切—连接—再酶切检测 | 最适反应温度下,使用 1 μl 快速内切酶 XhoI 消化底物,回收酶切产物。在 22 ℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。 |
非特异性内切酶活性检测 | 最适反应温度下,使用 1 μl 快速内切酶XhoI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。 |
蓝白斑检测 | 将含有单一lacZα 基因的载体以 1 μl XhoI 消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、 IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即 DNA 末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于 Reaction系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。 |
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 |
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 序列完全重叠剪切阻断 | 无影响 | 无影响 |
BIOISCO Reaction Buffer |
Thermo Scientific FastDigest Buffer |
NEB CutSmart® Buffer |
Takara QuickCut™Buffer |
|
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
北京索莱宝科技有限公司
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入驻年限:12年