内质网蓝色荧光探针（活细胞）

保存条件 ：−20°C

库存 ：咨询

供应商 ：北京索莱宝科技有限公司

规格 ：50ul

内质网蓝色荧光探针（活细胞）

 

 ER-Tracker Blue-White DPX内质网蓝色荧光探针（活细胞）

货号：E2380
规格：50ul（1mM）
保存：-20℃避光保存，1年有效期。避免反复冻融。
产品说明：
ER-Tracker 探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的 DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。
本品为 ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，蓝色荧光，属于 DapoxylTM（DPX）家族成员之一。 DPX 系列染料均具有长发射波长、高吸光系数、高量子产量等特点。但这些染料具有环境敏感性，会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
本品为溶于 DMSO 1mM ER-Tracker Blue-White DPX 储存液，推荐工作浓度为 100 nM-1 μM。
产品性质：
 
使用说明：
1.工作液的配制
 将 1 mM ER-Tracker Blue-White DPX 储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度 100 nM-1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象；
【注】1) 使用前将 ER-Tracker Blue-White DPX 回温至室温，并简短离心使该 DMSO 溶液至管底。
2）使用含 Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
2.染色
 
2.1 对于贴壁细胞
对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用 HBSS 清洗细胞，加入预热的染料工作液于 37℃孵育细胞 15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
【注】1）由于 ER-Tracker Blue-White DPX 探针具有较高光敏感性，会产生波动较大的发射吸收峰值，使用长通 DAPI 滤光片效果最理想。
2）操作过程中需尽量避光。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用 37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育 30 min～2 h（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。
【注】：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经 BD Cell-Tak 处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
3． 细胞固定及透化处理
3.1固定细胞：用 4%甲醛于 37℃固定细胞 10-20 min。
【注】1）已染色细胞用醛固定后，仅部分 ER-Tracker Blue-White DPX 留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
2）ER-Tracker Green染色的细胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Green的荧光染色消失
3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次 5 min，共 2 次。镜检即可。
注意事项：
1、ER-Tracker Blue-White DPX在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
2、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3、需自备盖玻片和载玻片。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。